沙门氏菌检验

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1、作业指导书文件编号：YCCDC/BZFF06-2016第1页共7页文件名称：沙门氏菌检验方法第1版第0次修改生效日期：2016年6月6日沙门氏菌检验1.范围本法适用于食品中沙门氏菌的检验。2.设备和材料处微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1冰箱：2c〜5C。22恒温培养箱：36C±1C,42C±1C。2.3均质器。2.4振荡器。2.5电子天平：感量0.1g。2.6无菌锥形瓶：容量500mL250mL。2.7无菌吸管：1mL（具O.OImL刻度）、10mL（具O.ImL刻度）或微量移液器

2、及吸头。2.8无菌培养皿：直径90mm2.9无菌试管：3mnX50mm10mnX75mm2.10无菌毛细管。2.11pH计或pH比色管或精密pH试纸。2.12全自动微生物生化鉴定系统。3.培养基和试剂3.1缓冲蛋白陈水（BPVV。3.2四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液。3.3亚硒酸盐胱氨酸（SC增菌液。3.4亚硫酸锄（BS）琼脂。3.5HE琼脂。3.6木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD琼脂。3.7沙门氏菌属显色培养基。3.8三糖铁（TSI）琼脂。3.9蛋白陈水、靛基质试剂。3.10尿素琼脂（pH7.2）。3.11氧化钾

3、（KCN培，养基。3.12赖氨酸脱竣酶试验培养基。3.13糖发醉管。3.14邻硝基苯B-D一半乳糖首（ONPG培养基。3.1半固体琼脂。3.2丙二酸钠培养基。3.3沙门氏菌。和H诊断血清。3.4生化鉴定试剂盒。4.检验程序沙门氏菌检验程序见图1。作业指导书文件编号：YCCDC/BZFF06-2016第2页共7页文件名称：沙门氏菌检验方法第1版第0次修改生效日期：2016年6月6日图1沙门氏菌检验程序作业指导书文件编号：YCCDC/BZFF06-2016第3页共7页文件名称：沙门氏菌检验方法第1版第0次修改生效

4、日期：2016年6月6日3.操作步骤3.1前增菌称取25g（mL样品放入盛有225mLBPW的无菌均质杯中，以8000r/min〜10000r/min均质1min〜2min，或置于盛有225mLBPW勺无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min〜2min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH值，用1mol/mL无菌NaOH或HCI调pH至6.8士0.2.无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36C±1C培养8h〜18h。如为冷冻产品，应在45c以下不超过15min,或

5、2c〜5c不超过18h解冻。3.2增菌轻轻推动培养过的样品混合物，移取1mL,转种于10mLTTB内，于42c土1C培养18h〜24h。同时，另取1（711_转种于10011.$0内，于36c±1C培养18h〜24h。3.3分离分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。与36C±1C分别培养18h〜24h（XLD平板、HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）或40h〜48h（BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落，各个平板上的菌落特

6、征见表1。表1沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板沙门氏菌BS琼脂菌落为褐色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可成黑色或棕色；有些菌株成灰绿色的菌落，周围培养基不变。HE琼脂蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。XLD琼脂菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。沙门氏菌属显色培养基按照显色培养基的说明进行判定。3.4生化试验3.4.1自选择性琼脂平板上分

7、别挑取2个以上典型或可以菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌，直接接种懒氨酸脱竣酶试验培养基和营养琼脂平板，于36c士1C培养18h〜24h，必要时可延长至48h。在三糖铁琼脂和懒氨酸脱粉酶试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果见表2。表2沙门氏菌属在三糖铁琼脂和懒氨酸脱镂酶试验培养基内的反应结果三糖铁琼脂懒氨酸脱竣酶试验培养基初步判断斜面底层产气硫化氢KA+(-)+(-)可疑沙门氏菌属KA+(-)+(-)—可疑沙门氏菌属AA+(-)+(-)可疑沙门氏菌属AA+/-+/-—非沙门氏菌作

8、业指导书文件编号：YCCDC/BZFF06-2016第4页共7页文件名称：沙门氏菌检验方法第1版第0次修改生效日期：2016年6月6日KK+/+/+/非沙门氏菌注：K：产碱，A:产酸；+：阳，性,一:阴性；+（一）:多数阳性，少数阴性；+）‘一:阳性或阴性。542接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱竣酶试验培养基的同时，可直接接种蛋白陈水（供做靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氧化钾（KCN培养基，也可在初