T∕NAIA 0119-2022 枸杞中螺虫乙酯及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱∕质谱法

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ICS65.100.01CCSB17TB团体标准T/NAIA0119-2022T/NAIA026—2021枸杞中螺虫乙酯及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法DeterminationofspirotetramatanditsmetabolitesresiduesinwolfberryLiquidchromatography-massspectrometry全国团体标准信息平台2022-04-27发布2022-05-01实施宁夏化学分析测试协会发布发布

1前言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。本文件起草单位：宁夏农产品质量标准与检测技术研究所、宁夏食品检测研究院、宁夏化学分析测试协会。本文件主要起草人：杨静、牛艳、王晓菁、吴燕、苟春林、刘霞、赵子丹、张锋锋、陈翔、开建荣、杨春霞、王彩艳、王芳、赵丹青、张学玲、张小飞。本文件为首次发布。全国团体标准信息平台

2枸杞中螺虫乙酯及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法1范围本文件规定了枸杞中螺虫乙酯及其代谢物残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本文件适用于枸杞中螺虫乙酯及其代谢物的液相色谱-质谱/质谱法测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。螺虫乙酯及其代谢物spirotetramatanditsmetabolites螺虫乙酯是一种具有双向内吸传导性能的现代杀虫剂，有四种代谢产物，分别为螺虫乙酯烯醇（spirotetramat-enol）、螺虫乙酯羟基酮（spriotetramat-keto-hydroxy）、螺虫乙酯烯醇葡萄糖苷（spriotetramat-enol-glucoside）和单羟基螺虫乙酯（spirteteramat-mono-hydroxy）。4原理试样用0.1%甲酸乙腈提取，用石墨化炭黑（GCB）和N-丙基乙二胺固相萃取（PSA）分散净化，用液相色谱-质谱/质谱仪检测和确证，外标法定量。5试剂与材料除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，水符合GB/T6682中规定的一级水。5.1全国团体标准信息平台乙腈（CH3CN）：色谱纯。5.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。5.3甲酸（CH2O2）：色谱纯。5.4氯化钠（NaCl）：分析纯。

35.5N-丙基-乙二胺吸附剂（PSA）：40µm～63µm。5.6石墨化炭黑（GCB）：120～400目。5.7农药标准品：螺虫乙酯（CAS号203313-25-1，纯度98.86%）、螺虫乙酯烯醇（CAS号203312-38-3，纯度99.12%）、螺虫乙酯羟基酮（CAS号187166-40-1，纯度98.1%）、螺虫乙酯烯醇葡萄糖苷（CAS号1172614-86-6，纯度95.70%）、单羟基螺虫乙酯（CAS号1172134-11-0，纯度94.24%）。5.8标准溶液配制5.8.1螺虫乙酯及其代谢物标准储备溶液：分别准确称取适量的螺虫乙酯及其代谢物标准品（精确至0.01mg），用甲醇溶解，分别配制成1000mg/L的标准储备溶液，-18℃下保存。5.8.2螺虫乙酯及其代谢物混合标准中间溶液：根据需要分别取适量螺虫乙酯及其代谢物的标准储备液，用乙腈稀释成10mg/L标准中间溶液，-18℃下保存。5.90.1%甲酸乙腈溶液（体积分数）。5.100.1%甲酸溶液（体积分数）。6仪器与设备6.1高效液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。6.2分析天平：感量0.01g和0.0001g。6.3组织捣碎机。6.4高速万能粉碎机：10000r/min。6.5振荡器。6.6离心机：4000r/min。6.7涡旋混合器。6.8离心管：50mL，塑料。6.9滤膜：0.22μm，有机相。7分析步骤7.1试样的制备鲜、干枸杞样品于-18℃冷冻冰箱中保存。试验时将鲜、干枸杞样品取出，鲜样用高速组织捣碎机打浆，干样用高速万能粉碎机（可加少量的液氮）粉碎（30g样品粉碎时间为30s），分别置于样品瓶中，-18℃冷冻备用。7.2全国团体标准信息平台样品提取与净化7.2.1鲜果称取试样10.00g（精确至0.01g）于50.0mL离心管，加入20.0mL0.1%甲酸乙腈溶液（5.9），在振荡器上震荡40min，加入5.0g氯化钠，盖上盖子，振摇约1min，放入离心

4机，4000r/min离心5min，吸取2.00mL上清液于15.0mL离心管中（提前称好50mgPSA和10mgGCB）涡旋净化后过0.22μm滤膜，用液相色谱-质谱/质谱测定。7.2.2干果称取试样5.00g（精确至0.01g）于50.0mL离心管，加水10.0mL复溶30min，加入20.0mL0.1%甲酸乙腈溶液（5.9），在振荡器上震荡40min，加入5.0g氯化钠，盖上盖子，振摇约1min，放入离心机，4000r/min离心5min，吸取2.00mL上清液于15mL离心管中（提前称好50mgPSA和10mgGCB）涡旋净化后过0.22μm滤膜，用液相色谱-质谱/质谱测定。7.3测定7.3.1液相色谱参考条件a）色谱柱：C18柱，150mm×2.1mm（i.d），3.5μm，或性能相当者。b）柱温：35℃。c）流速：0.4mL/min。d）流动相：A相为0.1%甲酸溶液（5.10），B相为乙腈，梯度洗脱条件见表1。e）进样量：2.0μL。表1流动相及其梯度条件（VA+VB）时间流速VA(%)VB(%)(min)(mL/min)0.000.390103.000.350507.000.3505011.000.3901012.000.3109015.000.310907.3.2质谱参考条件a）离子源类型：电喷雾离子源；b）扫描方式：选择离子监测模式；c）电喷雾电压：3.5kV；d）毛细管传输温度：300℃；e）碰撞压力：1.5mTorr；f）鞘气：30arb；全国团体标准信息平台g）辅气：10arb。表2螺虫乙酯及其代谢物的多反应离子监测分析参数滞留时间碰撞能量名称保留时间/min定性离子对/m/z定量离子对/m/z/s/eV

5螺虫乙酯374.1/216.10.1127.06374.1/302.1spirotetramat374.1/302.10.110302.1/216.10.120螺虫乙酯烯醇s-enol4.77302.1/268.1302.1/268.10.120螺虫乙酯羟基酮318.1/268.10.1185.06318.1/268.1s-keto318.1/300.20.118螺虫乙酯烯醇葡萄464.2/270.10.1293.03464.2/302.1糖苷s-glu464.2/302.10.129单羟基螺虫乙酯304.1/254.10.1144.49304.1/254.1s-mono304.1/272.10.1127.3.3色谱测定与确证根据试样中被测物的含量情况，选取响应值适宜的标准工作液进行色谱分析。标准工作液和试样中被测物的响应值均应在仪器线性响应范围内。在上述仪器条件下，螺虫乙酯、螺虫乙酯烯醇、螺虫乙酯羟基酮、螺虫乙酯烯醇葡萄糖苷、单羟基螺虫乙酯的保留时间分别约为7.06、4.77、5.06、3.03、4.49min，选择离子监测色谱图参见附录A。按照上述条件进行样品测定，若检测样品的色谱峰保留时间与标准品一致，且与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表1定性确证相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度>50%20%至50%10%至20%≤10%允许的相对偏差±20%±25%±30%±50%7.4空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。8结果计算和表达用色谱数据处理或按式（1）计算试样中各农药的含量，计算结果需将空白值扣除。ACV1000SX……………………………………（1）Am1000S式中：X——试样中被测物残留量的数值，单位为毫克每千克（mg/kg）；A——试样溶液中被测物的质量色谱图峰面积；全国团体标准信息平台V——试样中加入的提取溶液体积，单位为毫升（mL）；CS——标准工作液中被测物的质量浓度的数值，单位为毫克每升（mg/L）；AS——标准工作液中被测物的质量色谱图峰面积；m——试样质量的数值，单位为克（g）。

6注：测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。9精密度在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录B的要求。10定量限和回收率10.1定量限本方法的定量限螺虫乙酯、螺虫乙酯烯醇、螺虫乙酯羟基酮、螺虫乙酯烯醇葡萄糖苷、单羟基螺虫乙酯均为0.01mg/kg。10.2回收率本方法的添加浓度和回收率范围见附录C。全国团体标准信息平台

7附录A（资料性）螺虫乙酯及其代谢物LC-MS/MS的选择离子监测（SRM）色谱图螺虫乙酯及其代谢物LC-MS/MS的选择离子监测（SRM）色谱图见图A.1。RT:0.00-14.993.03NL:3.77E4100TICMSLCYZ+M-A-10a01-15.067.06504.490.130.871.752.132.703.544.105.466.036.647.338.348.649.029.5610.3511.1811.9712.5613.3614.4204.77NL:1.11E4100TICF:+cESISRMms2302.100[216.099-216.101,50268.099-268.101]MS3.03LCYZ+M-A-10a01-10.240.681.141.672.192.683.213.794.305.045.896.326.777.348.108.429.059.5410.3511.1511.9712.5613.3613.8004.49NL:1.52E4ec100nTICF:+cESISRMms2ad304.100nu[254.099-254.101,bA50272.099-272.101]MSeLCYZ+M-A-10a01-1vtilae0.660.871.732.032.393.063.544.064.715.575.996.647.307.748.059.099.3910.0510.5311.1811.48R05.06NL:2.37E4100TICF:+cESISRMms2318.100[268.099-268.101,50300.199-300.201]MSLCYZ+M-A-10a01-10.130.511.161.522.132.703.043.384.104.745.466.036.717.338.348.649.029.499.8807.06NL:1.88E4100TICF:+cESISRMms2374.100[215.999-216.001,50302.099-302.101]MSLCYZ+M-A-10a01-10.691.521.752.392.673.024.044.334.755.616.046.727.287.698.328.689.569.8810.6311.2711.9613.0413.4514.4203.03NL:3.77E4100TICF:+cESISRMms2464.200[270.099-270.101,50302.099-302.101]MSLCYZ+M-A-10a01-10.370.691.662.392.853.283.644.294.725.535.976.747.318.068.438.779.649.90001234567891011121314Time(min)图A.1螺虫乙酯及其代谢物LC-MS/MS的选择离子监测（SRM）色谱图全国团体标准信息平台

8附录B（规范性）实验室内重复性要求实验室内重复性要求，见表B.1。表B.1实验室内重复性要求被测组分含量精密度(RSD)mg/kg%>0.01≤0.1≤20>0.1≤1≤15>1≤10全国团体标准信息平台

9附录C（资料性）螺虫乙酯及其代谢物在枸杞基质中的添加浓度和回收率范围螺虫乙酯及其代谢物在枸杞基质中的添加浓度和回收率范围，见表C.1。表C.1螺虫乙酯及其代谢物在枸杞鲜、干果中的添加浓度及回收率范围添加浓度枸杞鲜果枸杞干果名称mg/kg回收率范围/%回收率范围/%0.0187.8～100.383.0～97.9螺虫乙酯spirotetramat0.191.5～101.894.5～109.4190.3～108.292.2～101.30.0170.8～74.670.9～84.4单羟基螺虫乙酯s-mono0.191.1～107.699.7～109.8198.7～107.297.6～107.00.0170.9～75.176.3～86.8螺虫乙酯烯醇葡萄糖苷s-glu0.170.9～74.383.9～106.3189.3～103.898.6～99.90.0183.0～97.170.4～75.7螺虫乙酯烯醇s-enol0.182.0～95.679.9～82.4182.1～92.7101.2～107.30.0183.3～106.596.7～107.6螺虫乙酯羟基酮s-keto0.199.8～109.3102.2～109.1191.8～102.487.0～109.9全国团体标准信息平台