武汉市腹泻婴幼儿隐孢子虫感染的分子流行病学调查.pdf

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1、中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn武汉市腹泻婴幼儿隐孢子虫感染的分子流#行病学调查*周蕊，刘晓洁5（武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室（武汉430071））摘要：目的了解武汉市2岁以下婴幼儿腹泻患者的隐孢子虫感染状况，为预防隐孢子虫感染提供分子流行病学依据。方法采集2014年8月-2015年7月在湖北省人民医院和武汉大学中南医院就诊的2岁以下婴幼儿腹泻患者的粪便，过滤沉淀后于2.5%重铬酸钾溶液中4℃10保存；采用酚-氯仿法提取基因组DNA、18SrRNA巢式PCR(Nested-PCR)扩增技术检测隐孢子虫感染，并对阳性PCR产物测序；所获

2、序列进行Blastn比对，应用MEGA软件采用邻接法构建系统进化树进行虫种鉴定。结果共收集到298份婴幼儿腹泻患者的粪便样本。经巢式PCR扩增技术检测，298份样品中有9份扩增出隐孢子虫阳性条带，阳性率为3.02%（9/298），其中1～2岁腹泻幼儿阳性率为5.93%(7/118），岁患儿的阳性率为151.11%(2/180)，差异有统计学意义（χ2=4.13；<0.05）。9份阳性PCR产物经测序后与GenBank上的参照序列进行比对，结果显示7份样本为微小隐孢子虫感染，2份样本为微小隐孢子虫与人隐孢子虫混合感染。绘制种系发育进化树发现，9条SSUrRNA基因序列与已发

3、表的微小隐孢子虫（Cryptosporidiumparvum）位于同一个进化支上。结论武汉地区婴幼儿腹泻患者中存在隐孢子虫感染，主要感染虫种为微小隐孢子虫。20关键词：微小隐孢子虫；人隐孢子虫；婴幼儿；腹泻；巢式PCR；分子流行病学；武汉中图分类号：R373MolecularepidemiologyofCryptosporidiuminfectionininfantswithdiarrheainWuhanCity25ZHOURui,lIUXiaojie(SchoolofBasicMedicalSciences,WuhanUniversity,185DonghuRoad,H

4、ubei430071,China)Abstract:ObjectiveTounderstandtheprevalenceofCryptosporidiuminfectionindiarrheainfantsunder2yearsoldinWuhanCity,soastoprovidetheepidemiologicalevidenceforthepreventionandtreatmentofcryptosporidiosis.MethodsThefecalsamplesfrominfantsunder2yearsoldwithdiarrhea30werecollecte

5、dintheHubeiGeneralHospitalandCentralSouthHospitalinWuhanCity,HubeiProvince,ChinafromAugust2014toJuly2015.Thefecalsampleswerestoredin2.5%potassiumdichromateat4°Cafterfiltered.TheDNAwasextractedfromthefecalpelletswiththephenol-chloroformmethod.TheCryptosporidiumspeciesweredetectedbyanestedP

6、CRassaytargetingtheSSUrMolecularepidemiologyofCryptosporidiuminfectionininfantswithdiarrheain35WuhanCityRNAgeneoftheparasite.AllpositivePCRproductsweresequencedonABI3100automatedsequencer,andtheamplifiedsequenceswerecomparedtohomologoussequencesintheNCBIdatabasebyusingtheBasicLocalAlignme

7、ntSearchTool(BLAST).PhylogeneticanalyseswereperformedbyusingthesoftwareMEGA(version4.0)basedontheNeighbour-Joiningmethod.ResultsThehumanstoolspecimens(n=298)werescreenedforthepresenceofCryptosporidiumbynestedPCR.40TheinfectionrateofCryptosporidiumwas3.02%(9/298).The