_肿瘤消_诱导肿瘤细胞凋亡的作用研究

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1、动物医学进展，２０１４，３５（１２）：８４－８８ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ“肿瘤消”诱导肿瘤细胞凋亡的作用研究江跃德１，曹晓蕾１，刘建军２，王晶钰１＊，康永祥２＊（１．西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌７１２１００；２．西北农林科技大学林学院，陕西杨凌７１２１００）摘要：研究“肿瘤消”的抗肿瘤活性和作用，为临床用药提供依据。通过ＭＴＴ法检测“肿瘤消”对多种肿瘤细胞株和正常细胞存活率的影响；采用Ｈｏｅｃｈｓｔ染色法和ＤＮＡ片段化分析对“肿瘤消”诱导ＭＤＣＣ－ＭＳＢｌ细胞凋亡的作用进行检测；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测“肿瘤消”诱导ＭＤＣＣ－ＭＳ

2、Ｂｌ细胞凋亡相关蛋白因子表达情况。ＭＴＴ法检测结果显示，“肿瘤消”对ＭＤＣＣ－ＭＳＢｌ、Ｃ６、ＳＰ２／０和Ａ５４９细胞的增殖具有明显抑制作用，对２９３Ａ细胞增殖无显著影响；Ｈｏｅｃｈｓｔ染色和ＤＮＡ片段化分析均证实“肿瘤消”能诱导ＭＤＣＣ－ＭＳＢｌ细胞凋亡；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测发现“肿瘤消”诱导ＭＤＣＣ－ＭＳＢｌ细胞凋亡与凋亡因子ｃａｓｐａｓｅ３、ｃａｓｐａｓｅ８和ｃａｓｐａｓｅ９的活化有关。证实“肿瘤消”具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用。关键词：“肿瘤消”；肿瘤细胞；ＭＴＴ法；细胞凋亡中图分类号：Ｓ８５２．３文献标识码：Ａ文章编号：１００７－５０３８（２０１４）１２－０

3、０８４－０５癌症（Ｃａｎｃｅｒ）已成为当前人类健康的一大杀为临床用药提供指导，对于科学、合理地开发太白山手。根据世界卫生组织国际癌症研究机构（Ｉｎｔｅｒｎａ－中草药资源具有重要意义。ｔｉｎａｌａｇｅｎｃｙｏｆｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｃａｎｃｅｒ）报告，２０１２年全１材料与方法［１］球新增癌症病例１４００万，死亡人数达８２０万，动１．１材料物肿瘤病的发病率和病死率也呈上升趋势。马立克１．１．１细胞株与试剂马立克淋巴瘤ＭＤＣＣ－ＭＳ－病（Ｍａｒｅｋ′ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＭＤ）和禽白血病（Ａｖｉａｎｌｅｕ－Ｂｌ细胞株、大鼠胶质瘤Ｃ６细胞株、小鼠骨髓瘤ＳＰ２／ｋｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＡＬ

4、Ｖ）等疾病是禽类常见的肿瘤病，具０细胞、人肺腺癌Ａ５４９细胞株和人胚肾２９３Ａ细胞有高致病性和传染性，给我国养殖业造成了严重损株均为实验室保存；ＲＰＭＩ－１６４０培养基购自Ｈｙ－［２］失。细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是由基因控制的细胞自ｃｌｏｎｅ公司；胎牛血清购自ＧＩＢＣＯ公司；ＭＴＴ购自我消亡过程，诱导肿瘤细胞凋亡已成为当前国际肿Ｓｉｇｍａ公司；ｃａｓｐａｓｅ９、ｐｒｏ－ｃａｓｐａｓｅ８、ｐｒｏ－ｃａｓｐａｓｅ３瘤治疗研究的热点。近年来的研究表明，许多中草蛋白质单克隆购于ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司；药的有效成分和提取液具有诱导肿瘤细胞凋亡的作Ｃｙ

5、３标记的β－Ａｃｔｉｎ抗体购自北京博奥森生物技术［３］用。有限公司；ＨＲＰ标记的ＩｇＧ二抗购自ＡｂｃａｍＩｎｃ公秦岭主峰太白山为我国三大药山之一，中草药司；ＲＩＰＡ裂解液、ＢＣＡ蛋白浓度测定试剂盒和Ｈｏ－资源丰富，其中有１４９种以“七”字命名的药用植物，ｅｃｈｓｔ３３２５８染色试剂盒购自碧云天生物技术研究［４］［５］即太白“七药”。早在１９４６年，ＫｉｎｇＬ等就从所。桃儿七中提纯出鬼臼毒素并用于抗癌。太白人民利１．１．２中草药制剂“肿瘤消”主要由以下药物组用“七药”治疗肿瘤的历史悠久、经验丰富，其中不乏成：芋儿七（ＴｒｉｌｌｉｕｍｔｓｃｈｏｎｏｓｋｉｉＭａｘｉｍ）、金牛七

6、特效药方。我们对这些抗肿瘤方剂做了大量的筛选（ＡｃｏｎｉｔｕｍｔａｉｐｅｉｃｕｍＨａｎｄ．Ｍｚｔ）、铁牛七（Ａｃｏｎｉ－和研究工作，最终从太白“七药”中筛选出６味中草ｔｕｍｓｚｅｃｈｅｎｙｉａｎｕｍＧａｙ）、灯台七（Ｒｈｉｚｏｍａｐａｒｉ－药组成抗肿瘤中药方剂，并命名为“肿瘤消”。“肿瘤ｄｉｓ）、追风七（Ｒｏｏｔｏｒａｌｌ－ｇｒａｓｓｏｆＡｌｅｐｐｏａｖｅｎｓ）和消”组方严谨、配伍得当，６味药配伍后水煎，以期达太白三七［Ｔｏｎｇｏｌｏａｄｕｎｎｉｉ（Ｂｏｉｓｓ．）Ｗｏｌｆｆ］。全部到增效、减毒的目的。本试验对“肿瘤消”诱导ＭＤ－药材均在适宜季节采自太白山，于干燥通风处自然

7、ＣＣ－ＭＳＢｌ细胞凋亡的作用和机理进行了研究，以期阴干，保存。将药材粉碎后，准确称量置瓦罐内，加收稿日期：２０１４－０４－２３基金项目：国家林业局林业公益性行业科研专项（２００９０４００４）作者简介：江跃德（１９８６－），男，云南大理人，兽医硕士，主要从事中药抗病毒研究。＊通讯作者江跃德等：“肿瘤消”诱导肿瘤细胞凋亡的作用研究８５相当于药材量４倍的蒸馏水浸泡２ｈ，煮沸６０ｍｉｎ，１．２．３Ｈｏｅｃｈｓｔ染色检测细胞凋亡经“肿瘤消”滤过；药渣加２倍量水继续煎煮，煮沸３０ｍｉｎ，滤过。刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入０．５ｍＬ