不同培养条件对产毒铜绿微囊藻和不产毒铜绿微囊藻生长竞争的影响

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1、浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙婆太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：桀复车签字日期：凹心年；月岔日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江太堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权盘婆太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可

2、以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：棠主糸导师签名：幽，0签字日期：2JIz年岁月g日签字日期：加fy年；月y日指导师严年半予我感谢许振兰师姐、吴海云师姐、夏云峰师兄、李晓娟师姐、周俊、孟慧娟、闰书海师弟、朱赛嫦师妹、张明美师妹、成卫孝师弟、李佳楠师弟在实验和生活中给予的帮助和支持。感谢25舍室友徐涛、孔宝、李清峰，蓝田44室友虞波、丁腾达、龙志峰，感谢你们的相伴和给予我的热情帮助。衷心感谢每一位关心、支持、帮助过我的老师和同学!最后，特别要感谢我的父母，谢谢你们多年来对我的鼓励和支持，感谢你们对我最无私的爱

3、!谢谢!朱金余2012．03浙大紫金港课题来源本课题来源于水体污染控制与治理科技重大专项“太湖流域苕溪农业面源污染河流综合整治技术集成与示范工程”．污水处理厂尾水“稳定塘．湿地”生态净化技术与示范”(No．2008ZX07101—006．B)。研究意义水体富营养化导致的蓝藻爆发，影响水体景观和产生恶臭，并导致水中其他生物死亡，更严重的是部分蓝藻会产生毒素，给生态系统和公共饮用水安全带来极其严重的威胁。近几十年来，随着经济的飞速发展，大量的工业废水和农业面源污染导致水体中N、P等营养元素浓度很高，水华问题日益引起人们关注。铜绿微囊藻是水华时的优势藻种，铜绿微囊藻可分为产毒铜绿微囊藻

4、和不产毒铜绿微囊藻，不同的环境条件可以影响产毒铜绿微囊藻和不产毒铜绿微囊藻的竞争关系，从而使这两种藻的比例发生变化。本课题建立一套测定水中铜绿微囊藻浓度的实时荧光定量PCR方法。应用实时荧光定量PCR分别检测混合培养液中产毒铜绿微囊藻和不产毒铜绿微囊藻的量，通过PB设计在光照、温度、pH、硝态氮离子浓度、P离子浓度这五个因素中筛选出三个显著的影响因子并应用中心组合实验设计法设计并考察这三个因素对产毒／不产毒铜绿微囊藻生长竞争的综合影响，为进一步研究蓝藻水华暴发机理提供了参考依据。n浙江大学硕士学位论文摘要铜绿微囊藻是水华时的优势藻种，铜绿微囊藻可分为产毒铜绿微囊藻和不产毒铜绿微囊

5、藻，不同的环境条件可以影响这两种藻的竞争关系。本文对比并选择了一种最佳的铜绿微囊藻DNA提取方法并据此建立一套测定水中产毒和不产毒铜绿微囊藻浓度的实时荧光定量PCR方法，应用该方法检测混合培养液中两张藻量，通过PB设计和CCD设计考察了光照、温度、pH、硝态氮离子浓度、P离子浓度这五个因素对产毒／不产毒铜绿微囊藻生长竞争的综合影响。全文研究内容和实验结果如下：(1)分别对比了SDS裂解法、DNeasyBlood＆TissueKit试剂盒、CTAB提取法提取铜绿微囊藻DNA的效果，结果表明采用DNeasyBlood&TissueKit试剂盒提取DNA具有很好的重复性，提取效率稳定；

6、SDS裂解法也能有效提取铜绿微囊藻的DNA，但是重复性略差；CTAB法在提取样品DNA时发生了降解。(2)分别用SDS裂解法和DNeasyBlood&TissueKit试剂盒提取不产毒铜绿微囊藻标准品的DNA并建立标准曲线。结果表明采用DNeasyBlood&TissueKit试剂盒提取的标准品DNA具有很好的重复性，采用该方法提取的标准品DNA经PCR扩增后可以建立相关性很好的标准曲线用于产毒和不产毒铜绿微囊藻浓度的定量检测。(3)应用实时荧光定量PCR检测混合培养液中的产毒铜绿微囊藻和不产毒铜绿微囊藻的细胞浓度，通过PB设计在光照、温度、pH、硝态氮离子浓度、P离子浓度这五个

7、因素中根据影响显著性分析筛选出光照、硝态氮离子浓度、温度这三个影响因子，然后采用中心组合实验设计法对这三个影响因子进行3因素5水平的组合实验设计，实验结果经RSM拟合，显示在混合培养初期，不产毒铜绿微囊藻很快能占据优势，而较强的光照强度和较高的硝态N离子浓度促进产毒铜绿微囊藻在混合培养中的竞争生长能力。关键词：DNA提取；实时荧光定量PCR；竞争培养；产毒铜绿微囊藻；不产毒铜绿微囊藻III浙江大学硕士学位论文AbstractMicrocystisaeruginosaisthema