津田芜菁泛素化相关蛋白基因brrub1的克隆及表达分析

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1、作物学报ACTAAGRONOMICASINICA2015,41(1):6671http://zwxb.chinacrops.org/ISSN0496-3490;CODENTSHPA9E-mail:xbzw@chinajournal.net.cnDOI:10.3724/SP.J.1006.2015.00066津田芜菁泛素化相关蛋白基因BrRUB1的克隆及表达分析*闫海芳王斐李桥李鸿昌杨虎城东北林业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150040摘要:RUB1(relatedtoubiquitin1)是植物和酵母中一种泛素类似蛋白质,是Cullin家族的

2、一个成员。为阐释津田芜菁BrRUB1基因的表达特性,本研究克隆了津田芜菁RUB1基因的全长cDNA序列,命名为BrRUB1,GenBank登录号为KF501173。其ORF全长471bp,编码156个氨基酸;亚细胞定位结果显示,BrRUB1-GFP定位于细胞核,表明BrRUB1蛋白可能在细胞核中发挥其功能。qRT-PCR检测BrRUB1的表达表明,该基因表达量在花蕾中最高,花瓣中次之,具有组织特异性。而且BrRUB1在芜菁根皮中的表达受长波紫外线(UV-A)诱导。关键词:津田芜菁;RUB1;基因克隆;表达分析CloningandExpressio

3、nAnalysisofUbiquitin-RelatedProteinGeneBrRUB1inBrassicarapaL.cv.Tsuda*YANHai-Fang,WANGFei,LIQiao,LIHong-Chang,andYANGHu-ChengCollegeofLifeScience,NortheastForestryUniversity,Harbin150040,ChinaAbstract:RUB1(relatedtoubiquitin1)isaubiquitin-likeproteininplantandyeast,belongtoCu

4、llinfamily.ToelucidatetheexpressionfeatureofRUB1inTsuda,weisolatedcDNAofRUB1genefromthisplantandnamedBrRUB1(GenBankaccessionNo.KF501173).ThecDNAofBrRUBIwas670bpinfulllengthanditsopenreadingframe(ORF)was471bpinfulllength,encoding157aminoacids.BrRUB1-GFPwaslocalizedtonucleus,in

5、dicatingthatBrRUB1mayplayanimportantroleinthenucleus.qRT-PCRanalysisshowedthatBrRUB1expressedhighlyinbudandlessinpetal,showingtissuespecificity.Furthermore,theexpressionofBrRUB1wasinducedbyUV-Alightintheswollenhypocotyls.Keywords:Brassicarapa;RUB1;Genecloning;Expressionanalys

6、isRUB1(relatedtoubiquitin1)是植物和酵母中一生长发育和形态建成外,还在包括植物膜受体的内种类似泛素分子的蛋白质,在哺乳动物中又称为在化、染色质异构、转录激活以及DNA修复、植物[4-7]NEDD8蛋白(neuralprecursorcell-expressed,deve-应对干旱和冷害等非生物胁迫反应中发挥功能。lopmentallydown-regulatedprotein)。RUB1是泛素化津田芜菁(BrassicarapaL.cv.Tsuda)膨大的肉质根不E3连接酶家族Cullin家族的一个成员,它可以对蛋见光部

7、分呈白色,无花青素的合成;而见光部分呈紫白质肽链进行修饰,也可以被参与调控植物体感受色,有花青素的合成。单色光中只有在UV-A诱导下[8]激素信号的蛋白AXR1(auxinresistant1)和ECR1可合成花青素。本文根据已经报道的拟南芥序列,(erythrocytecomplementreceptortype1)以异源二聚通过RT-PCR结合RACE技术克隆了芜菁BrRUB1基体的形式构成RUB激活酶,与Cullin蛋白内保守的因,并对该基因的定位和表达进行研究,以期为深入赖氨酸残基结合,正调控Cullin蛋白组成的E3复合探讨RUB1在芜

8、菁中的功能提供参考依据。体,加强E3复合体和Ub-E2复合体的稳定性,影响1材料与方法生物体内多种调节蛋白的功能,从而调控植物体生长发育