高脂饮食对模拟低氧环境机体主动脉的影响及其机制

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1、高脂饮食对模拟低氧环境机体主动脉的影响及其机制　　内皮型一氧化氮合酶(eNOS)催化左旋精氨酸产生的一氧化氮(NO)有扩张血管、抑制平滑肌细胞增殖和抑制血小板聚集等作用，可调节血管张力、维持血管稳态，对心血管系统具有多重保护作用，是临床评定内皮功能的重要指标。高脂血症可降低常氧环境机体NO的生成与生物利用度，减弱其对血管的保护作用，引起内皮损伤，平滑肌细胞增殖，启动心血管疾病的发生与发展。　　高脂血症对低氧环境人群主动脉存在怎样的影响尚不明确。本研究通过观察SD大鼠主动脉病理形态变化、检测主动脉eNOS蛋白表达及血浆硝酸盐/亚硝

2、酸盐(NOx)含量(间接反映NO含量)，探讨高脂饮食对模拟低氧环境机体主动脉的影响及其机制。　　1资料与方法　　1.1一般资料　　1.1.1实验动物2012年9月22日10月26日，将20只体重180～200g的6周龄清洁级Sprague-Da。H+HFD组大鼠灌服脂肪乳剂，10mL/kg/d，1次/d；H组大鼠灌服等体积生理盐水，普通饮食。于4周末抽取大鼠静脉血，置于抗凝管，并留取主动脉标本于-80℃冰箱保存。　　1.1.2脂肪乳剂采用前期研究的方法制备脂肪乳剂。　　1.1.3主要仪器和试剂冷冻离心机、DU800核酸蛋白仪(德

3、国BECKMAN)，低压氧舱室(贵州风雷航空机械有限公司)，丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及一氧化氮(NO)试剂盒由南京建成生物公司提供，血脂检测试剂盒、BCA蛋白分析试剂盒、eNOS及β-actin一抗、二抗分别由北京利德曼生化股份有限公司、PierceChem-icalpany、Abcam公司、SantaCruzBiotechnologylnc提供。　　1.2方法　　1.2.1主动脉病理形态观察取主动脉标本固定，脱水，包埋，切片，HE染色，观察病理形态改变。　　1.2.2血浆SOD活力和MDA含量测定于

4、3000r/min离心抗凝血（10min），分离血浆。用DA含量。　　1.2.3血脂水平检测采用直接测定法检测血浆高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)含量，采用终点法检测血浆总胆固醇(TCH)及甘油三酯(TG)含量。　　1.2.4血浆NOX水平检测采用硝酸还原酶法检测血浆NOX水平。　　1.2.5主动脉eNOS蛋白水平检测将主动脉切成小块，裂解组织，匀浆，离心，取上清，检测样品总蛋白浓度。用5蛋白上样缓冲液于100℃变性5min。采用12%SDS-PAGE电泳分离蛋白。使用半干转印槽将蛋白转印至PVDF膜上。用5%脱脂

5、奶粉在室温下封闭2h，然后加兔抗eNOS(1:250)，β-actin(1:1000)，4℃孵育过夜。　　于洗膜后用辣根过氧化物酶标记羊抗兔二抗(1:6000)室温孵育2h，使用ECL液发光显影。胶片扫描后用ImageJ软件分析，计算目的与内参条带积分光密度值的相对比值。1.3统计学方法应用SPSS17.0统计软件包，计量资料用（x±s）表示，组间比较采用t检验，检验水准α=0.05。　　2结果　　2.1主动脉病理形态变化　　H组内皮细胞肿胀，核变圆，局部内膜脱落，平滑肌细胞增生，细胞核变椭圆

6、，局部胞浆疏松，细胞轻度排列紊乱；H+HFD组局部内膜大片脱落，内皮细胞肿胀，平滑肌细胞明显增生，细胞核变圆，胞浆空泡变明显，细胞排列紊乱，见图1。　　　　2.2血脂水平检测　　H+HFD组LDL、TCH含量明显高于H组，两组间的TG与HDL水平无明显差异，见表1。【表1】　　　　2.3血浆MDA含量与SOD活力的测定　　H+HFD组MDA含量与SOD活力均明显低于H组，见表2。　　2.4血浆NOx水平测定　　H+HFD组大鼠血浆NOx含量低于H组，见表2。　　2.5主动脉eNOS蛋白表达水平测定　　H组(0.82±

7、;0.15)与H+HFD组(0.91±0.17)大鼠主动脉eNOS蛋白表达水平无明显差异(t=-0.885,P=0.402)。【表2】　　　　3讨论　　本研究通过观察SD大鼠主动脉病理形态变化、检测主动脉eNOS蛋白表达及血浆NOx含量，探讨高脂饮食对模拟低氧环境机体主动脉的影响及其机制。结果显示，相对于低氧组，低氧联合高脂饮食组主动脉病理损伤加重，eNOS蛋白表达水平无明显变化，而血浆NOx含量明显降低，血浆TCH及LDL明显升高；低氧联合高脂饮食组血浆SOD活力低于低氧组，表明高脂饮食可加重模拟低氧环境大鼠主动

8、脉的损伤。　　NO是高原适应与习服的重要指标之一，高原世居藏族循环血NO代谢产物高于低海拔人群的水平，可增加血流灌注及氧传递，以抵消低氧影响，而机体NO含量降低则可引起高原适应不良。本研究中低氧联合高脂饮食组血浆NOx含量明显低于低氧组，与文献报道一致，即高脂饮