dehp对大鼠睾丸能量代谢酶的影响及其氧化损伤作用

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1、DEHP对大鼠睾丸能量代谢酶的影响及其氧化损伤作用：李丽萍，刘秀芳，宁艳花，刘桂珠，李春燕【摘要】目的观察邻苯二甲酸二(2-乙基已基)酯(DEHP)对大鼠睾丸能量代谢酶的影响及其氧化损伤作用。方法将32只健康雄性大鼠随机分为4组，即阴性对照组(玉米油)和DEHP染毒组(375、750、1500mg·kg-1)。采用经口灌胃的方式重复染毒30d，于末次染毒24h后，取右侧睾丸制备组织匀浆，采用分光光度法测定LDH、SDH、ATPase及SOD、MDA、GSHPx和GSH的活性。结果随着染毒剂量增加，与对照组比较，SOD活力与MDA含量增高，1500mg·kg-1

2、组差异具有统计学意义(P<0.05);GSH与GSH-Px活力先增高后降低，GSH-Px活力差异均具有统计学意义(P<0.01)，GSH活力差异均无统计学意义(P>0.05);SDH酶活性增高，差异均具有统计学意义(P<0.01);Na+-K+-ATPase的活性750mg·kg-1组差异具有统计学意义(P<0.01)，LDH、Ga2+-ATPase、Mg2+-ATPase活性差异均无统计学意义(P>0.05)。结论DEHP可能通过影响睾丸生殖细胞能量代谢及脂质过氧化损伤作用对雄性大鼠睾丸发挥毒性作用，其毒作用特点可能表现为

3、毒物兴奋效应。【关键词】邻苯二甲酸二(2-乙基已基)酯;大鼠;睾丸;氧化损伤邻苯二甲酸酯类化合物(Phthalatic-acidesters，PAEs))作为增塑剂广泛用于食品包装材料、容器、医疗用品及人造革等方面，其中用量最大的邻苯二甲酸二(2-乙基已基)酯[phthalate(2-ethylhexyl)ester，DEHP]，销售量占PAEs总量的40%[1]。DEHP在塑料中以游离的形式存在，重量上可达30%～50%，很容易进入环境，可以在地表水、地下水、饮用水、空气、土壤及动、植物体内广泛检测到，与人类生活密切相关，尤其存在于一些食品包装及医疗器械中，

4、因而人类受危害的可能性较大[2]。目前的研究发现其毒性作用主要是作为内分泌干扰物，表现为生殖生长毒性、肝肾毒性及血液和生化方面的改变。本次研究以雄性大鼠为研究对象，采用经口灌胃的方式染毒，从DEHP对大鼠睾丸生殖细胞能量代谢和氧化损伤作用的角度探讨其生殖毒性作用机制，为进一步研究DEHP及其同类化合物的雄性生殖毒性作用机制提供研究基础。　　1材料和方法　　1.1实验动物健康雄性大鼠[清洁级，宁夏医科大学实验动物中心提供，动物合格证号SCXK(宁)2005-0001，动物房合格证号SYXK(宁)2005-0001]32只，体重280～320g。　　1.2试剂DE

5、HP(国药集团化学试剂有限公司)，玉米油(市售)，考马斯亮蓝测定蛋白、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GSH)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、ATPase测定试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。　　1.3实验动物分组与染毒　　将32只健康雄性大鼠随机分为四组，每组8只，即DEHP染毒组(375、750、1500mg·kg-1)和阴性对照组(玉米油，0.4mL/100g)，采用经口灌胃重复染毒的方式，每天染毒1次，每周染毒5d，连续染毒30d，实验期间，大鼠自由饮水、进食。于末次染毒

6、24h后，10%水合氯醛腹腔注射麻醉，心尖采血处死大鼠，取右侧睾丸组织称重，制备睾丸组织匀浆待测。　　1.4观察指标及测定方法　　1.4.1观察DEHP对雄性大鼠体重增长量的影响染毒期间，每7d称量体重1次，观察不同剂量染毒组大鼠体重增长变化情况。　　1.4.2DEHP对雄性大鼠睾丸和附睾脏器系数的影响取双侧睾丸、附睾称重后与体重的比值即为脏器系数。　　1.4.3DEHP对大鼠睾丸组织氧化损伤指标的测定GSH-Px、GSH、SOD、MDA的测定均按南京建成生物工程研究所提供的试剂盒说明书操作。　　1.4.4DEHP对大鼠睾丸能量代谢酶的测定LDH、SDH、AT

7、Pase的测定均按南京建成生物工程研究所提供的试剂盒说明书操作。　　1.5统计学方法　　采用SPSS11.5统计软件对结果进行分析，结果用(±s)表示，采用one-g·kg-1组差异具有统计学意义(P<0.01)，Mg2+-ATPase、Ca2+-ATPase的活性差异均无统计学意义。表4DEHP染毒对大鼠睾丸能量代谢酶活性的影响　　3讨论　　孙俊红等[3]测定了包括医用输液袋、保鲜膜、一次性塑料袋等塑料制品浸出液中DEHP的含量，结果表明，仅一次性塑料袋中可检测出DBP的含量为91.45μg·kg-1，据美国毒物与疾病登记署(ATSDR)估算，普通人群

8、对DEHP的最大日接触量为2mg·d-