人脐血干细胞移植治疗大鼠脑出血的实验研究

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1、人脐血干细胞移植治疗大鼠脑出血的实验研究作者：潘凤华，丁新生Δ，李晓波，丁海霞，张炜民，邓小萱，姚娟目的研究人脐血干细胞（humanumbilicalcordbloodcells，HUCBC）移植治疗脑出血大鼠的效果及HUCBC在出血大鼠脑内的状况。方法采集足月新生儿脐带血60～100ml，分离出其中的单个核细胞，体外培养并予5-溴脱氧嘧啶尿苷（Brdu）标记48h。用VII型胶原酶注入到大鼠右侧苍白球诱导脑出血模型，24h后经尾静脉注射3×106HUCBC入大鼠体内，同时设立生理盐水组及对照组，对移植后大鼠的神经损害严重程度评分（neurologicalseverityscores

2、，NSS），移植后35天杀死大鼠，用免疫组织化学技术研究移植后的HUCBC的存活、迁徙、分化状况。结果HUCBC在体外具有增殖能力；HUCBC移植组大鼠自移植后21天起其NSS显著低于生理盐水组及对照组（P<0.05）；移植后35天脑组织切片中可见Brdu染色阳性细胞，出血侧明显多于对侧，神经上皮干细胞蛋白（Nestin）以及神经元标记神经元烯醇化酶（NSE）染色呈弱阳性，胶质纤维酸性蛋白（GFAP）染色呈强阳性；生理盐水组及对照组未见各染色阳性细胞。结论HUCBC植入大鼠出血脑内能存活并向损伤区域迁徙，分化为星形胶质细胞和神经元，从而改善其神经功能。HUCBC移植可作为脑出血

3、的有效治疗手段。【关键词】人脐血干细胞；移植；脑出血【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectofthehumanumbilicalcordstembloodcells(HUCBC)transplantationtotreatintracerebralhemorrhagicratsandthestatusoftransplantedHUCBCinthehemorrhagicbraintissueoftheserats.MethodsHUCBCgotfromtheplacentaoffull-termbabiesarkedol/l)fortorrhage

4、(ICH)modelsmunohistochemistrymethodigrationanddifferentiationofHUCBCinrats.ResultsTheHUCBChadthecapacityofproliferationinvitro.Tuchbetterthantheratsodeoxyuridine(Brdu)reactiveHUCBCajorityofcellslocalizedinthehemorrhagichemisphereandfeisphere.Afecellsmarkersneuroepthelialstemcellprotein(Nestin)a

5、ndtheneuronalmarkersneuron-specificendase(NSE)，butmoreHUCBCarkerglialfibrillaryacidicproten(GFAP).ConclusionTheHUCBChadthecapacityofproliferation、migrationanddifferentiationpropertiesinvivo，thetransplantedcellsdifferentiatedintoastrocytesandneuronsbytheinflucenceofthehemorrhagicmicroenvironment

6、alsignals.HUCBCtransplantationmayprovideanovelapproachtotreatcerebralhemorrhage.【Keyanumbilicalcordstembloodcells；transplantation；cerebralhemorrhage脐血中富含造血干/祖细胞，间充质干细胞以及内皮干/祖细胞等，具有较强的增殖、分裂能力，可以向神经细胞方向分化。本实验主要探讨在大鼠脑出血的情况下经尾静脉注射移植人脐血干细胞（humanumbilicalcordbloodcells，HUCBC）的可行性，对中枢神经系统损伤修复的作用和可能的机制

7、。1材料与方法1.1材料1.1.1动物及分组成年雄性SD大鼠（上海实验动物中心提供）30只，质量270～320g。30只SD大鼠于模型制作过程中因麻醉等原因死亡2只，模型制作不成功4只，其余24只模型制作成功大鼠随机分为(1)对照组（6只）；(2)生理盐水组（9只）；(3)HUCBC移植组（9只）。1.1.2主要试剂与仪器（1）试剂：人淋巴细胞分离液（1.077，天津产），人红细胞裂解液，细胞培养试剂DMEM/F12（1：1，Gibco），B27添加剂（G