DB34T1361-2011饲料中氯霉素的测定-气相色谱质谱法.pdf

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1、ICS65.120B46DB34安徽省地方标准DB34/T1361—2011饲料中氯霉素的测定－气相色谱质谱法Determinationofchloramphenicolinfeed－Gaschromatographymassspectrometrymethod2011-03-16发布2011-04-16实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T1361—2011前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。

2、本标准主要起草人：刘红云、蔡一杰、吴蕾、明文庆、张莉、丁作坤、陶小平、钱志平、吴昊。IDB34/T1361—2011饲料中氯霉素的测定－气相色谱质谱法1范围本标准规定了饲料中氯霉素检验的气相色谱质谱测定方法。本标准适用于饲料中氯霉素的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样3试样制备按GB/T14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减

3、取约200g，粉碎至过0.45mm孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中备用。4原理饲料经磷酸缓冲液均质后，用乙酸乙酯提取。用硅胶和C18固相萃取柱对乙酸乙酯提取物进行净化和富集。用N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+三甲基氯硅烷（TMCS）衍生化，供气相色谱质谱进行定性和定量分析。5试剂和溶液5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682二级水的规定。5.2氯霉素标准品：纯度≥99％。5.3标准储备液：准确称取氯霉素标准品适量，用甲醇溶解配制成100µg/mL，作为标准储备溶液。4℃冰箱保存，有效期1个月。5.4标准工作液：

4、精密量取适量氯霉素储备液，用甲醇稀释成浓度为0.5、5.0、10.0、50.0、100.0、200.0ng/mL的标准工作液。4℃保存7天。5.5衍生化试剂：N,O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）+三甲基氯硅烷TMCS（99:1）。5.6pH6.8磷酸缓冲液：取0.2mol/L磷酸氢二钾溶液250mL，加0.2mol/L氢氧化钠溶液118mL，加水使溶解成1000mL，摇匀，即得。5.7甲醇：色谱纯。5.8乙腈：色谱纯。5.9乙酸乙酯：色谱纯。1DB34/T1361—20115.10二氯甲烷。5.11正己烷。5.12气相色谱质谱淋洗液：二氯

5、甲烷／正己烷=（1：1）。5.13固相萃取柱：规格500mg/6mL，填料C18。5.14硅胶固相萃取柱：规格1000mg/6mL。5.15微孔滤膜：孔径0.25µm，有机相。6仪器设备6.1气相色谱质谱仪。6.2高速冷冻离心机，不低于10000r／min。6.3饲料粉碎机。6.4氮吹仪。6.5旋转蒸发仪。6.6固相萃取装置。6.7分析天平，感量0.0001g，0.001g。6.8振荡器。6.9涡旋混合器。6.10超声波清洗机。6.11离心管，50mL。6.12梨形瓶，50mL。6.13单通道可调移液器：1～10µL、5～50µL、50～200µL、2

6、00～1000µL。7测定步骤7.1试样提取称取粉碎后的饲料样品5g（精确至0.001g）于50mL离心管中，加入l0mLpH6.8磷酸缓冲液，混合均匀。用30mL乙酸乙酯分3次提取，振荡30min，10000r／min离心5min，合并提取液，在55℃水浴下旋蒸掉大部分溶剂，剩余的溶剂用氮气吹至近干，用5mL5％乙腈水溶液溶解残留物。7.2净化硅胶固相萃取小柱依次用5mL乙腈、5mL淋洗液活化；（7.1）项下的提取液残留物上样；5mL气相色谱质谱淋洗液淋洗，5mL20％乙腈水溶液洗脱。用6mL乙酸乙酯分三次提取洗脱液，合并提取液并吹干，用5mL5％乙

7、腈水溶液溶解残留物，待C18固相萃取柱进一步净化。C18小柱依次用5mL乙腈、5mL水活化，上样，5mL水淋洗，5mL乙腈洗脱，收集洗脱液备用。7.3样品衍生化用氮气吹干上述乙腈洗脱净化液，加入100µL衍生试剂，密封后70℃衍生1h，氮气吹干，加0.5mL正己烷溶解。同时分别取标准工作系列（5.3）1mL用氮气吹干后，加入100µL衍生试剂，按试样同法操作。待气相色谱质谱分析。7.4气相条件2DB34/T1361—2011色谱柱：5％苯基甲基聚硅氧烷，柱长30m，内径0.25mm，膜厚0.25μm或性能相当的色谱柱。进样口温度：250℃。升温程序：起

8、始温度100℃（保持1min），以30℃/min的速率升温至280℃（保持9min）。载气：氦