_嗜酸耐热菌的测试方法-doehler

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1、德乐食品饮品配料（上海）有限公司DoehlerFood&BeverageIngredients(Shanghai)Co.,Ltd.文件名称DocumentName微生物品控操作手册文件类型DocumentType作业指导书WorkingInstruction生效日期Effectivedate文件编号DocumentNo.版本号VersionNo.页码Page2012.8.23DL-WI-LD-003034of4起草人PreparedBy审阅人ReviewedBy批准人ApprovedBy1、目的Purpose:本文件规定了微生物检测的方法.2、适用范围Scope:适应于果汁和

2、果汁浓缩液、水等的微生物的检验。3、职责Responsibility1）微生物检验员按各产品规格书和检验方法的要求执行日常的检验工作；2质量部经理负责日常检验工作的督导。4.程序Procedure:4.28嗜酸耐热菌的测定方法.4.28.1定量分析-涂布法（适用于浊汁类）4.28.1.1无菌吸取10ml样品加入90ml无菌水中。4.28.1.2放进80±1℃水浴锅里热激活样品10分钟。4.28.1.3冰水浴冷却样品至40℃～45℃4.28.1.4用无菌吸管吸取1ml样品分别移入2个做好的YSG或BAT平板表面。4.28.1.5用无菌涂布棒将样液在平板上涂抹均匀4.28.1.6

3、将涂抹好的平板平放于桌上20—30min。4.28.1.7如果菌液不能很好地渗透入培养基里，则将平板平放在45℃培养箱里培养一天，再倒过来放进塑料自封袋中。4.28.1.8放在45℃±1℃的培养箱中培养至少5天4.28.1.9观察并报告。1）读取平板上的菌落数，结果以：菌落数*10/ml表示；2）若平板没有任何菌落形成，记成：<10cfu/ml.4.28.2定量分析—膜片分析法（适用于清汁类）4.28.2.1无菌吸取10ml样品加入装有50ml无菌水的灭菌瓶里。德乐食品饮品配料（上海）有限公司DoehlerFood&BeverageIngredients(Shanghai)C

4、o.,Ltd.文件名称DocumentName微生物品控操作手册文件类型DocumentType作业指导书WorkingInstruction生效日期Effectivedate文件编号DocumentNo.版本号VersionNo.页码Page2012.8.23DL-WI-LD-003034of44.28.2.2放在80±1℃水浴锅里热激活样品10分钟。4.28.2.3冰水浴冷却样品至40℃～45℃4.28.2.4组装已灭菌的抽滤装置，安上0.45微米的滤片，打开真空泵，将灭菌瓶里的样液进行抽滤，再用30ml无菌水冲洗，取出滤片，平放在做好的YSG或者BAT-平板上。4.28

5、.2.5将平板倒着，放进塑料自封袋中，45℃±1℃的培养箱中培养至少5天。4.28.2.6观察并报告。1）读取平板上的菌落数，结果以：菌落数*/10ml表示；2）若平板没有任何菌落形成，记成：<1cfu/10ml.4.28.3定性检测（适用于一切果汁）4.28.3.1无菌吸取浓缩果汁10ml加入90mlBAT-Bouillon；RTD(糖度小于15白利度的果汁，无菌吸取50ml加入50mlBAT-Bouillon(Doehler2.04717.782)。4.28.3.2放在80±1℃水浴锅里热激活样品10分钟4.28.3.3冰水浴冷却样品至40℃～45℃4.28.3.4放进4

6、5℃±1℃的培养箱中培养至少3天4.28.3.5然后用接种环吸取足够量的培养后的样品，在做好BAT平板中划线；同时接种足够量的培养后的样品，在做好的PCA平板上划线。4.28.3.6将划好线的BAT和PCA平板放在塑料自封袋中，倒放入45℃±1℃的培养箱中培养至少5天4.28.3.7观察并报告。1）若PCA划线有菌落生长，则不管BAT板上划线有无菌落生长，都判断无嗜酸耐热菌。2）若PCA划线无菌落生长，而BAT板上划线有菌落生长，则判断有嗜酸耐热菌，并须做愈创木酚实验。.4.28.4愈创木酚实验：如果YSG/BAT琼脂平板上有菌落生长须做愈创木酚实验：4.28.4.1愈创木酚

7、测试盒（试剂盒存放于黑暗干燥处）1)40个培养管（2mL诱发培养液）2)溶液1：50mL缓冲液，pH4.03)溶液2：900uLH2O2溶液（蓝色瓶盖）4)溶液3：酶试剂（褐色小瓶褐色盖）。在第一次使用前用900uL蒸馏水均匀溶解。酶制剂制备后应当储存在2-8°C且在3-4个月必须用完。德乐食品饮品配料（上海）有限公司DoehlerFood&BeverageIngredients(Shanghai)Co.,Ltd.文件名称DocumentName微生物品控操作手册文件类型DocumentType作业指导