dna和rna提取方法及原理 和 提取方法及原理 dna提取专题 dna提取专题第一部分

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1、DNA和RNA提取方法及原理和提取方法及原理DNA提取专题DNA提取专题第一部分：第一部分：DNA提取方法简介提取方法简介第二部分：第二部分：DNA提取常见问题分析及对策提取常见问题分析及对策前言DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物是遗传信息的载体，是遗传信息的载体信息分子，是分子生物学研究的主要对象。信息分子，是分子生物学研究的主要对象。为了进行测序、杂交和基因的表达，获得高分子了进行测序、杂交和基因的表达，量和高纯度的DNA是非常重要的前提。是非常重要的前提。量和高纯度的是非常重要的前提DNA提取原则DNA提取

2、原则保证DNA结构的完整性纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质排除有机溶剂和金属离子的污染蛋白质、多糖、脂类等降低到最低程度排除其他核酸分子的污染DNA提取的几种方法DNA提取的几种方法染色体DNA的提取染色体DNA的提取DNACTAB法法SDS法SDS法其它DNA提取的几种方法DNA提取的几种方法非染色体DNA的提取的提取非染色体质粒DNA的提取的提取质粒?碱裂解法?煮沸法线粒体、叶绿体线粒体、叶绿体DNA的提取的提取?差速离心结合差速离心结合SDS裂解法裂解法基因组DNA－CTAB法基因组DNA－CTAB法CTAB

3、法原理（植物提取经典方法）法原理植物DNA提取经典方法提取经典方法）CTAB（hexadecyltrimethylammoniumbromide，十六烷基三甲基（，溴化铵），是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，），是一种阳离子去污剂溴化铵），是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物。该复合物在高盐溶液中（该复合物在高盐溶液中（>0.7mol/LNaCl）是可溶的，通过有机溶剂）是可溶的，抽提，去除蛋白、多糖、抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。出来。溶液在低于15℃时会形成沉淀

4、析出，注：CTAB溶液在低于℃时会形成沉淀析出，因此在将其加入冰冷的溶液在低于植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于℃植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。基因组DNA－CTAB法基因组DNA－CTAB法CTAB提取缓冲液的经典配方提取缓冲液的经典配方Tris-HCl（pH8.0）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；EDTA螯合2+或Mn2+离子，抑制螯合Mg离子，抑制DNase活性；活性；螯合活性NaCl提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中；提供一个高盐

5、环境，DNP充分溶解存在于液相中；充分溶解，CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；溶解细胞膜β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，巯基乙醇是抗氧化剂CTAB提取缓冲液的改进配方提取缓冲液的改进配方PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的络合物，物质，有效去除多酚，减少中酚的污染；物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合

6、，中酚的污染同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。有效去除多糖。基因组DNA－CTAB法基因组DNA－CTAB法CTAB法流程图法流程图植物材料裂解液酒精沉淀液氮研磨抽提离心洗涤DNA溶液溶液细胞裂解上层溶液干燥溶解基因组DNA－SDS法基因组DNA－SDS法SDS法原理法原理SDS是一种阴离子去垢剂，在高温（55～65℃）条件下能裂解细是一种阴离子去垢剂，在高温（～℃是一种阴离子去垢剂使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸；胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸；提高盐(KAc或NH4Ac)浓度并降低温度（冰浴），使蛋白

7、质及多糖或浓度并降低温度（提高盐浓度并降低温度冰浴）杂质沉淀，离心后除去沉淀；杂质沉淀，离心后除去沉淀；上清液中的DNA用酚氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的用酚/氯仿抽提上清液中的用酚氯仿抽提，DNA。。基因组DNA－SDS法基因组DNA－SDS法SDS法流程图以动物组织为例）SDS法流程图（以动物组织为例）动物组织抽提离心洗涤组织匀浆上层溶液干燥溶解细胞裂解酒精沉淀DNA溶液溶液基因组DNA－基因组DNA－其它方法根据细胞裂解方式的不同有：根据细胞裂解方式的不同有：物理方式：玻璃珠法、超声波法、研磨法、物理方

8、式：玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法化学方式：异硫氰酸胍法、化学方式：异硫氰酸胍法、碱裂解法生物方式：生物方式：酶法基因组DNA－基因组DNA－其它方法根据核酸分离纯化方式的不同有：根据核酸分离纯化方式的不同有：吸附材料结合法：吸附材料结合法：???硅质材料高盐低pH值结合核酸，低盐高pH值洗脱。高盐低pH值结合核酸，低盐高pH值洗脱。pH值