卵泡刺激素(fsh)elisa试剂盒

卵泡刺激素(fsh)elisa试剂盒

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时间:2017-11-06

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1、卵泡刺激素(FSH)ELISA试剂盒(德国DRG:EIA-1288)1、应用范围DRG公司的卵泡刺激素酶免试剂盒可用于血清中FSH(卵泡刺激素)的定量检测。此检测试剂盒仅供体外诊断用。2、前言说明FSH和LH两者密切的控制着性腺组织的生长和的繁殖活动,性腺组织通过负反馈的构效关系合成和分泌雄性激素和雌性激素。FSH是垂体前叶嗜碱细胞分泌的一种糖蛋白。下丘脑产生的促性腺激素释放激素(GnRH)可控制垂体前叶FSH的释放。和其它糖蛋白一样,如:LH、TSH和HCG,FSH由两个亚单位组成,分别为α和β。这种类型的激素其

2、α亚单位在结构上都非常类似,因此每一激素的生物学和免疫学活性主要依赖于其β亚单位的独特性。在女性中,FSH直接作用于粒细胞的受体而刺激卵泡的生长和成熟;从而增加卵泡类固醇激素的分泌和LH的产生。产生的LH之后结合到卵泡膜细胞上并刺激类固醇的分泌。在接近卵泡成熟时,卵巢内雌二醇的水平就开始增加,于是雌二醇的刺激作用可增加FSH受体的活性和FSH卵泡性结合。因此,在女性中,FSH、LH和雌二醇密切相连促进卵巢的发育和成熟。在绝经后、阉割和卵巢早衰的情况下,FSH的水平会表现为提高。通过雌激素的调节(雌激素表现的是一种负

3、反馈机制),FSH的水平可能会变得规范化。FSH和LH、FSH和雌激素之间关系的不正常与神经性食欲缺乏症和多囊卵巢并相关联。当FSH随机抽样的浓度超过10mIU/mL时表明患有卵巢衰竭疾病的这一观点,人们对此存在着明显的异议。男性中,生精小管的发育和精子发生的维持同样会受到FSH的调节。然而和雌激素不一样,雄性激素并不会降低FSH的水平,因此它仅与血清LH之间表现为负反馈的关系。因为对FSH还不是完全了解,但人们发现精子稀少的男性通常FSH水平会提高。如通过放免检测得到的结果:睾丸癌一般会降低血清FSH浓度,而提高

4、LH浓度。因此人们推测:LH浓度的明显增加可能是通过与由睾丸癌分泌的hCG样物质的交叉反应所造成的。在原发性睾丸功能障碍和克氏综合征男性患者中,我们可发现高浓度的FSH水平。FSH浓度的提高同样也出现在饥饿、肾功能衰竭、甲状腺功能亢进和肝硬化的情况下。3、实验原理DRG公司的FSH酶免实验是一种基于夹心法原理的固相酶联免吸附实验(ELISA)。反应板上的微检测孔包被有能结合FSH分子上独特抗原位点的单克隆抗体。一份含有内源性FSH的病人样本在包被孔中与酶联物进行孵育,该酶联物是一种联结有辣根过氧化物酶的抗FSH抗血

5、清。孵育后,用洗涤液洗去未结合的酶联物。结合上的辣根过氧化物酶的总量与样本中FSH的浓度成正相关。加入底物溶液后,显出的颜色强度与病人样品中FSH的浓度成正比。4、试剂盒成分1)微量反应板,1块(96孔),微孔中包被了抗FSH的单克隆抗体。2)酶联物,1ml,内含抗辣根过氧酶标记的抗FSH抗血清。3)底物液,11ml(TMB)4)标准系列,6支(冻干粉),即:0,5,10,20,50,100mIU/ml,转换系数:1ng/ml=0.34mIU/ml。5)终止液:0.5M的H2SO4,,6ml5、实验需要器材(但试剂

6、盒不提供)1)酶标仪(450±10nm)。2)移液器3)吸水纸4)标准水箱5)蒸馏水6、试剂贮存:未开启的试剂在2—8℃FSH-3下贮存,在有效期内可以保持活性。不要使用过期试剂,酶联物、底物溶液、标准品和零标准品必须在2—8℃下贮存。微孔反应板必须在2—8℃下贮存。一旦包装袋被打开,必须将它小心地严封起来。如果包被板的包装被打开,其免疫活性在6周内稳定,但前提是必须将它密封在装有干燥剂的袋子里。7、样品的采集1)静脉穿刺采集全血,待其凝血,在室温下用离心机分离血清,避免溶血。2)必须盖住样本并在实验之前于2-8℃

7、下可贮存48小时。样品需要更长的贮存时间,则应将样品冻存于-20℃的环境下。解冻的样本在检测之前必须上下倒置几次。注意:用于此试剂盒的样品不能含有任何添加剂。8、试剂的准备参考标准:在冻干的标准品中加入1.0ml双蒸水。注意:配制好了的标准品可在2-8℃下稳定存放2个月。想要存放更长时间应当将其冻存于-20℃的环境下。9、一般注意事项1)实验开始前,将所有试剂和样本都平衡至室温,试剂混合时避免起泡。2)实验一旦开始,所有的步骤应完整地进行下去。3)每一样品的取样都得使用新的取样吸头。4)吸光度与温育时间和温度有关,

8、在实验开始后所有的试剂都应准备好,以保证加液时间的一致。5)本试剂盒最大吸光度(OD)在1.200-2.000之间(室温22℃,显色10分钟以内)。如果最大OD值高于您酶标仪的上限或低于1.000,则相应的减少或延长显色反应的温育时间。一般情况下,酶免反应的强度与时间和温度成线性,这使得操作者应当适当的调整物理化学环境。10、实验步骤1)将所需数目的板条置于

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