实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测

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1、实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测介绍的TCID50测定方法。溶细胞性病毒的毒力与其致细胞病变的能力直接相关，固可用不同含量的病毒液接种敏感的宿主细胞培养物测定毒力。实验中病毒的毒力以其致细胞病变效应（cytopathiceffectCPE）的程度确定，即观察病毒致细胞病变的最高和最低值，以半数细胞病变为病毒感染剂量。然而，实验中所能观察到的是不同稀释病毒致细胞病变的定性结果，需要将结果统计处里，用Reed-Muench公式计算，才能获得病毒TCID50的相对定量（滴度或效价）。为了便于理解，以一病毒致细胞病变的观察结

2、果，介绍Reed-Muench公式的计算方法。首先获得表Ⅻ-2的观察结果：从表中可见，该病毒的TCID50在10-3和10-4稀释度之间。表Ⅻ-2病毒CPE观察结果根据Reed-Muench公式“TCID50=高于50%CPE百分率病毒稀释度的对数+比距×稀释因子的对数”（1）式中，比距=高于50%CPE百分率－50(2)，将表Ⅻ高于50%CPE百分率－低于50%CPE百分率91.6－50=0.8。再将比距值代入（1）式中，㏒10-3+0.891.6－40-2的数值代入（2）式中，则比距=×㏒10-1=-3.8，则㏒

3、TCID50=-3.8，即TCID50=10-3.8。查反对数得6310，即该病毒6310倍稀释度0.1ml等于1个TCID50。三、器材1.病毒及宿主甲型流感病毒（influenzavirusA），传代犬肾细胞系MDCK（Canisfamiliaris）。2.培养基DMEM细胞培养液（含10%小牛血清，100μg/ml的青、链霉素）。3.溶液或试剂0.25%胰酶液，0.1mol/L，磷酸缓冲液（PBS,pH7.2）。4.仪器或其他用具96孔细胞培养板，10~200μl可调试加样器，无菌小试管，血细胞计数器，倒置显微

4、镜，普通显微镜，CO2培养箱。四、操作步骤1.MDCK细胞培养常规复苏液氮冻存的MDCK细胞，接种于培养方瓶中，加入7~10mlDMEM培养液，充分混匀，置37OC培养2~3d，待细胞形成致密单层备用。2.细胞悬液制备MDCK单层细胞一瓶，弃上清夜，加0.25%胰酶1ml，37OC消化2~5min，待细胞完全脱壁后加入3mlDMEM培养液，充分分散细胞。取样显微计数，调整细胞浓度为2×105~5×105/ml。胰酶消化时间不宜过长，否则对细胞造成损伤。初学者可将细胞培养瓶置显微镜下观察，细胞变圆脱壁即可。3.细胞接种

5、取96孔塑料细胞培养板一块，用加样器分别向每孔加入细胞悬浮液200μl。4.细胞培养板置37OC，5%CO2的培养箱中培养24h，细胞快速生长，形成70%左右的单层可用于病毒接种。5.病毒稀释将病毒液在5ml无菌试管内作连续10倍稀释，即用1ml吸管吸取0.2ml病毒液，加到-1装有1.8mlPBS的第1支小试管内（10），充分混匀后，更换吸管，吸取0.2ml加入第2管-6中，连续如此操作，继续第3支稀释，如此类推，稀释到第6管（10）.篇二：边缘检测实验报告图像边缘提取实验报告一、实验目的通过课堂的学习，已经对图像

6、分割的相关理论知识已经有了全面的了解，知道了许多图像分割的算法及算子，了解到不同的算子算法有着不同的优缺点，为了更好更直观地对图像分割进行深入理解，达到理论联系实际的目的，特制定如下的实验。二、实验原理检测图像边缘信息，可以把图像看做曲面，边缘就是图像的变化最剧烈的位置。这里所讲的边缘信息包含两个方面：一是边缘的具体位置，即像素的坐标；而是边缘的方向。微分算子有两个重要性质：定域性(或局部性)、敏感性(或无界性)。敏感性就是说，它对局部的函数值变化很敏感，但是因其对变化过于敏感又有了天然的缺陷——不能抵抗噪声。局部性

7、意思是指，每一点的导数只与函数在该点邻近的信息有关。主要有两大类基于微分算子的边缘检测技术：一阶微分算子边缘检测与二阶微分算子边缘检测。这些检测技术采用以下的基本步骤：(1)将相应的微分算子简化为离散的差分格式，进而简化为模板(记为T)。(2)(3)利用模板对图像f(m,n)进行运算，获得模板作用后的结果Tf(m,n)。提出阈值h,在采用一阶微分算子情形记录下高于某个阈值h的位置坐标Sh?{(m,n)

8、(m,n)?h}(而采用二阶微分算子情形，一般是对某个阈值??0确立Sh?{(m,n)

9、Tf(m,n)??})(4)

10、对集合Sh进行整理，同时调整阈值h。Roberts算子Roberts算子是一种利用局部差分算子寻找边缘的算子，两个模板分别为?10??0?1?Rx??R?y??10?0?1????则，Rxf(i,j)=f(i,j)?f(i?1,j?1)Ryf(i,j)=f(i?1,j)?f(i,j?1)算法的步骤为：(1)首先用两个模板分别对图像作用得到Rxf