中药抗癌灵对肝癌smmc7721细胞增殖的影响

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1、中药抗癌灵对肝癌SMMC7721细胞增殖的影响：韦鹏涯，浦洪琴，韦星，李朝敢，农嵩【摘要】　　目的观察中药抗癌灵（Kangailing,Ka）对人肝癌SMMC7721细胞增殖的影响并探讨其可能分子机制。方法提取、配制不同抗癌灵生药浓度，作用于体外培养的人肝癌SMMC7721细胞，采用MTT法检测细胞增殖抑制率，流式细胞仪法检测凋亡率，二步法免疫组化检测野生型P53、NFкBP65和Bcl2蛋白表达变化。结果与正常对照组比较，Ka各浓度组细胞抑制率显著上升（P＜0.001），细胞凋亡率明显升高（P＜0.01或P＜0.00

2、1），P53蛋白表达显著上升（P＜0.001），NFкB和Bcl2蛋白表达明显下降（P＜0.001）。结论Ka通过诱导细胞凋亡而抑制肝癌SMMC7721细胞增殖，其分子机制可能与上调野生型P53蛋白表达，下调NFкBP65和Bcl2蛋白表达有关。【关键词】中药抗癌灵肝癌细胞增殖细胞凋亡基因表达　　【Abstract】ObjectiveToobservetheeffectsoftraditionalChinesemedicineKangailingonproliferationinhumanhepatomaSMMC77

3、21celllinesinvitroandinvestigateitspossiblemolecularmechanism.MethodsTheproliferationinhibitoryrateinedbyfloetry.Theexpressionofmunhistochemicalstaining.ResultsThecellinhibitoryrateandapoptoticrateandtheexpressionofP53ProteinofKatreatmentgroupsincreasedobviouslythant

4、hatofcontrolgroup(P＜0.001),arkedly(P＜0.001).ConclusionKangailingcouldinhibittheproliferationofSMMC7721cellsinvitrobyinducingcancercellapoptosis,anditsmolecularmechanismmaybeassociatededicine;Kangailing;livercancer;proliferation;apoptosis;geneexpression.　　肿瘤不仅是细胞增殖和分

5、化异常的疾病，也是细胞凋亡异常的疾病。越来越多证据表明，中药抗癌的疗效与中药诱导肿瘤细胞凋亡有关。许多天然药物可以通过干扰肿瘤细胞生长、代谢和增殖等过程，最终诱导触发肿瘤细胞发生凋亡，从而达到抑制肿瘤细胞增殖的作用［1，2］。复方中药抗癌灵(Kangailing，Ka)由白英、白花蛇舌草、半枝莲和半边莲等中草药组成，具有清热解毒、活血化瘀等功效。临床上该复方广泛应用于各种癌症的治疗，尤其对肝癌、肺癌、胃癌及鼻咽癌等有较好的疗效。本研究通过观察中药Ka对人肝癌SMMC7721细胞增殖作用的影响，旨在探讨其分子作用机制，为该复方中

6、药应用于肝癌的临床治疗提供理论依据。　　材料和方法　　1.材料　　人肝癌SMMC7721细胞株由中科院上海细胞生物研究所细胞库提供，胎牛血清(FBS)、RPMI1640培养基为GIBCO公司产品，四甲基偶氮唑蓝（MTT）为上海普飞生物技术有限公司产品，碘化丙啶(propidiumiodide,PI)为Sigma公司产品，鼠抗人NFкBP65、野生型P53和Bcl2单克隆抗体为Santacruz公司产品，PosK3酶标仪（芬兰雷勃公司），BX51型显微镜（OLYMPUS，日本），流式细胞仪(BectonDickinson,U

7、SA)。　　2.方法　　（1）药物提取取复方中药抗癌灵(购买于百色市中医院中药房)干品100g，用1000ml水浸泡1h，加热煮沸后小火煎熬60min，室温冷却，120目网筛过滤，弃药渣，滤液离心(3000r/min×20min×2次)。取上清液，浓缩至50ml，调pH值为7.0～7.2，0.22μm过滤除菌，获生药含量为2.0g/ml的Ka水提液,5ml/瓶分装，-20℃保存备用，实验时将含10ûS的RPMI1640培养液稀释至所需的药物浓度。　　（2）细胞培养和实验分组　　体外培养人肝癌SMMC7721细胞，以

8、含100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、10%FBS的RPMI1640培养液，在37℃、5%CO2的培养箱中培养，细胞生长至对数增殖期，取生长良好的细胞做实验。细胞随机分为对照组（不加药物处理）和Ka组（浓度分别为10、20、40ml/L）。药物作用时间