子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养对小鼠胚胎早期发

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1、子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养对小鼠胚胎早期发　[摘要]　　目的：采用子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养，观察其对早期胚胎体外发育的影响。方法：对小鼠子宫内膜上皮细胞进行分离、培养鉴定，然后与体外受精的小鼠胚胎进行共培养，观察共培养对小鼠胚胎卵裂率、孵化率以及囊胚期胚胎总细胞数的影响。结果：与无上皮细胞相比，共培养明显促进了小鼠桑椹胚率（71.3%和61.2%，P<0.05），囊胚率（50.0%和39.7%，P<0.05），囊胚孵化率（34.8%和24.3%，P<0.05）和胚胎总细胞数（44.1和35.6，P<0.05）。结论：

2、子宫内膜上皮细胞能够促进小鼠胚胎的体外发育，对早期胚胎的体外发育环境具有优化作用。　　[关键词]　　子宫内膜上皮细胞；共培养；体外受精；小鼠　　EffectsofCocultureofMouseEmbryoetrialEpithelialCellsonEarlyMouseEmbryonicDevelopment　　　　Abstract:ObjectiveToobservetheeffectsofcocultureofmouseembryoetrialepithelialcellsonearlyembryonicdevelopmentinvitro.Met

3、hodsMouseendometrialepithelialcellsouseembryosfertilizedinvitro.Thepercentageofembryocleavage,blastocysthatchingandtotalcellnumberofblastocystetrialepithelialcellscouldpromotetheformationofmousemorula(71.3%and61.2%,P<0.05)andblastocyst(50.0%and39.7%,P<0.05),andincreasethebl

4、astocysthatchedrate(34.8%and24.3%,P<0.05)andtotalcellnumberofblastocyst(44.1and35.6,P<0.05).ConclusionCocultureetrialepithelialcellscanfacilitatethedevelopmentofearlymouseembryoinvitro,izetheconditionofembryonicdevelopmentinvitro.　　Keyetrialepithelialcells;Coculture;Invitro

5、fertilization;Mouse　　早期胚胎发育是一个极其复杂的过程，受到多种因素的影响。在生殖医学等多个领域，胚胎体外培养技术已得到很大的提高，胚胎与体细胞共培养因其能够克服体外发育阻滞、提高移植后胚胎着床率[1]等优势而成为一种有效的胚胎体外培养途径。共培养的方法很多，其中以采用雌性生殖道细胞的效果最佳[2,3]。为进一步研究体细胞对胚胎体外发育环境的影响，本实验采用小鼠子宫内膜上皮细胞和早期胚胎进行共培养，观察其对小鼠胚胎卵裂率、孵化率以及囊胚期胚胎总细胞数的影响。　　1　　材料与方法　　1.1　　材料　　1.1.1　　实验动物:15只20g

6、的昆明雌性小鼠购于中国科学院遗传与发育所实验动物中心。实验动物房光、暗周期均为12h，饲养温度为24℃~26℃，自由采食饮水。　　1.1.2　　试剂:DMEM培养基（Gibco公司）；胎牛血清（FBS,杭州四季青公司）；孕马血清促性腺激素（PMSG）和人绒毛膜促性腺激素（HCG）(宁波激素制品厂)；兔抗人角蛋白多克隆抗体（Novocastra公司）；生物素标记的羊抗兔IgG和辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Zymed公司);实验中其余所用化学药品和试剂购自Sigma公司。　　1.2　　方法　　1.2.1　　小鼠子宫内膜上皮细胞的分离培养:根据[5]，体外

7、受精方法参见王敏康[6]等人的报道。受精后体外培养24h，均等卵裂为2-细胞者判定为受精卵。冷冻细胞复苏后接种于96孔培养板，体外培养3d。共培养前用含0.4%BSA的mKSOM培养基润洗细胞两次，加入新鲜mKSOM培养基。在无上皮细胞单层的培养孔中也同样加入新鲜mKSOM培养基作为对照组，培养板置于CO2培养箱预热3h。受精卵随机放入对照组和实验组的各培养孔中，每孔放入胚胎20~30个。置入37℃、5%CO2的培养箱中培养，每24小时更换新鲜培养基，每日观察记录胚胎的发育情况。　　1.2.4　　囊胚期胚胎细胞计数:囊胚期的胚胎用含1%多聚甲醛室温下固定

8、5min，固定好的胚胎移入Hoechst33342染色液滴中，室温孵育5min。