叶酸偶联5氟尿嘧啶壳聚糖纳米粒的制备及其体外性质研究

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1、叶酸偶联5氟尿嘧啶壳聚糖纳米粒的制备及其体外性质研究【摘要】目的研究叶酸偶联壳聚糖载5氟尿嘧啶纳米粒的制备方法及体外性质。方法根据叶酸与壳聚糖的偶联比选择最佳工艺条件,通过叶酸活性酯与壳聚糖上的氨基反应,制备叶酸偶联壳聚糖,再通过离子交联法制备叶酸偶联壳聚糖纳米粒包合5氟尿嘧啶,从而制成载药纳米粒。结果制备了叶酸壳聚糖偶联物,并包合5氟尿嘧啶成纳米粒,载药量为10.4%，包封率为50.5%，8h累积释药量达35.9%。结论优化了叶酸偶联5氟尿嘧啶壳聚糖纳米粒的制备工艺。【关键词】叶酸;纳米粒;5氟尿嘧啶;壳聚糖Abstract:ObjectiveTopreparefola

2、teconjugated5fluorouracilchitosannanoparticles(5FUCSNPfolate)andevaluateitspropertyinvitro.MethodsTheoptimaltechnologicalconditionsinegroupofchitosan.Folateconjugated5fluorouracilchitosannanoparticlesountofaccumulatedreleaseized.Keyacia)，5氟尿嘧啶（5FU，南通精华制药有限公司）,叶酸(上海新量化工试剂有限公司),无水二甲基亚砜

3、(DMSO)、二环己基碳二亚胺(DCC)、N羟基琥珀酰亚胺(NHS)等试剂均为国产分析纯。1.2仪器SHZ82恒温震荡器（金坛市富华仪器有限公司），TU1700紫外可见分光光度计（苏州岛津仪器有限公司），H600透射电镜（HITACHI），1000HSA激光粒度分布仪（英国马尔文公司）。2叶酸偶联壳聚糖(FCS)的制备和纯化2.1叶酸活性酯的制备称取叶酸300mg(0.67mmoL),溶于无水DMSO10mL中,再加入DCC93mg(0.45mmoL)和NHS77mg(0.67mmoL)及三乙胺500μL,反应过夜,过滤除去反应副产物二环己基脲（DCU）,减压蒸馏除去部分溶剂

4、,在搅拌中逐滴滴入冰冷的含30%丙酮的无水乙醚溶液中,得到黄色沉淀物,过滤,真空干燥,得到叶酸活性酯〔1〕。2.2叶酸偶联壳聚糖的制备　　称取20mg壳聚糖（分子质量5kD）,悬浮于5mL无水DMSO中,磁力搅拌下逐滴滴入叶酸活性酯DMSO溶液2mL,在适当温度（50℃）下反应2h,过滤，滤渣用蒸馏水洗涤数次，用质量分数2%醋酸溶液10mL溶解,低速离心后取其上清液,用SephadexG25葡聚糖凝胶柱进行分离,收集，冷冻干燥后备用。2.3叶酸偶联壳聚糖的纯化2．3．1叶酸偶联壳聚糖的纯化选用SephadexG25葡聚糖凝胶柱进行分离,以质量分数2%的醋酸溶液为流动相进行洗脱,流

5、速为1.5mL/min，在叶酸波长为363nm处监测洗脱过程，叶酸偶联壳聚糖的洗脱曲线见图1。由图1可见,第一个峰对应的是分子量大的叶酸偶联壳聚糖,第二个峰对应的是分子量较小的游离叶酸,表明2者通过凝胶柱的分子筛效应得到了完全的分离。2.3.2叶酸偶联壳聚糖的紫外扫描图2为纯化后的叶酸偶联壳聚糖及壳聚糖在醋酸水溶液的紫外扫描比较图。由图可见壳聚糖在240～500nm范围内无紫外吸收,而纯化后的叶酸偶联壳聚糖在280nm处显示了叶酸的特征吸收峰。结果表明叶酸已成功与壳聚糖偶联。广东药学院学报，2008，24(6)第6期何练芹,等.叶酸偶联5氟尿嘧啶壳聚糖纳米粒的制备及其体外性质研究2

6、.3.3叶酸偶联壳聚糖制备工艺优化2.3.3.1叶酸标准曲线的制备精密称取叶酸11.5mg,置100mL容量瓶中,用醋酸醋酸钠缓冲液(pH=5.8)溶解并稀释至刻度,分别取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL于10mL容量瓶中,用醋酸醋酸钠缓冲液稀释至刻度,以醋酸醋酸钠缓冲液为空白,用紫外分光光度计在363nm处测定吸光度,以叶酸质量浓度对吸光度作标准曲线,得回归方程A=0.0142ρ+0.0034(r=0.9998)，表明叶酸的质量浓度在5.75～34.5μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。2．3．3．2偶联比的计算精密称取少许纯化后叶酸偶联壳聚糖的冻干粉,

7、溶解于2%醋酸中,用2%醋酸定容至10mL,然后在363nm处测定紫外吸光度,计算每毫克叶酸偶联壳聚糖中叶酸的含量。偶联比=被偶联的叶酸的量（mg）被偶联的壳聚糖的量（mg）=M叶酸×N叶酸M壳聚糖×N壳聚糖2．3．3．3正交试验采用L9（34）正交试验表，以偶联比为指标，考察叶酸壳聚糖的质量比、反应时间、反应温度3个因素。因素水平表及试验结果见表1-表3。表1因素水平表表2L9（34）正交设计表表3方差分析表从上表可知,各因素对偶联比的影响程度为A&g