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《原发性肝癌组织中肝素酶表达与肝癌侵袭 转移关系的研究 》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、原发性肝癌组织中肝素酶表达与肝癌侵袭转移关系的研究罗志强刘锋邵江华邬林泉【摘要】目的探讨乙酰肝素酶(HeparanaseHpa)在肝癌中的表达及其与肝癌临床病理特征的关系。方法分别采用RT-PCR和免疫组织化学法检测HpamRNA及Hpa蛋白在肝细胞肝癌、癌旁肝组织及肝癌细胞株中的表达。结果肝癌HpamRNA和蛋白的表达显著高于癌旁及正常肝组织(P0.05),肝癌组织中HpamRNA的表达与TNM分期、Edmondson分级和复发有关(P0.05)。结论HpamRNA及蛋白在肝癌中高表达,并与肝癌的侵袭转移、复发、预后有关。【关键词】肝细胞肝癌乙酰肝素酶侵袭转移复发【Abstract】O
2、bjectiveThemainaimofthisinvestigationistoexploretheexpressionofheparanasemRNAandproteininhepatocellularcarcinoma(HCC)anditsrelationshiperasechainreaction(RT-PCR)andimmunohistochemicalstainingRNAandproteininnormalhepatictissues,tumortissuesandadjacenttissuesofhepatocellularcarcinoma.ResultsTheexpr
3、essionofHpamRNAandproteininHCCtissuesalhepatictissues(P0.05).Itondson-Steiner’sclassification(P0.05).ConclusionOverexpressionoftheheparanasemRNAandproteinrelatestotheinvasion,metastasis,recurrenceandprognosisofhepatocellularcarcinoma.【KeyaHeparanaseInvasionMetastasisRecurrence乙酰肝素酶(heparanase,HPA
4、)是1999年克隆分离出的一种葡糖苷酸内切酶。它可降解硫酸乙酰肝素(hearansulfate,HS),破坏细胞外基质和血管基底膜,并促进肿瘤新生血管生成,使肿瘤细胞实现侵袭转移。作者运用RT-PCR和免疫组织化学法对HpamRNA及Hpa蛋白在肝细胞肝癌、癌旁肝组织及肝癌细胞株中的表达进行检测,检测33例原发性肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)标本中HPA的基因表达,并结合病人的临床病理学和随访资料,以探讨HPA可否作为HCC转移潜能的可靠标志。1临床资料1.1一般资料新鲜冷冻的标本取自2005年8月至2006年4月南昌大学第二附属医院普外科手术切除并
5、经病理学检查证实的33例HCC(包括癌和癌旁肝组织)和9例肝脏良性肿瘤(取瘤旁肝组织作正常对照)。收集病人临床病理学检查资料,HCC组中男28例,女5例;年龄29～73岁,平均49岁。28例术后6～16个月内获得随访,占85%(28/33)。根据手术记录、术后病理学检查报告等,将有癌栓、肝内播散即卫星癌灶和(或)淋巴结转移的14例HCC病人定为高转移复发倾向组。反之,无癌栓、肝内卫星癌灶和(或)淋巴结转移的19例HCC病人为低转移复发倾向组。其中癌灶长径≤5cm8例,＞5cm25例;癌灶包膜完整14例、不完整19例;甲胎蛋白(AFP)阳性26例、阴性7例;HBsAg阳性27例、阴性6例;
6、合并明显肝硬化18例、无明显肝硬化15例;肿瘤EdmondsonⅠ、Ⅱ级13例、Ⅲ、Ⅳ级20例;TNMⅠ、Ⅱ期18例、Ⅲ、Ⅳ期15例。随访有和无转移复发各14例。肝脏良性肿瘤9例中男4例,女5例;年龄32～65岁,平均41岁;其中肝海绵状血管瘤8例、肝局灶性结节性增生1例。1.2总RNA提取和半定量RT-PCR检测Trizol总RNA分离试剂盒(Gibco)Trizol一步法提取组织总RNA,甲醛变性胶电泳鉴定及紫外分光光度仪测定OD值后,逆转录合成cDNA。AMV为TaKaRa公司产品,dNTP购自上海生物工程公司。HPA引物参照文献〔１〕设计,由上海生物工程公司合成,上游为5’-2T
7、TCGATCC2CAAGAAGGAATCAAC23’,下游为5-2GATTCAGTTA2CATGGCATCACTAC-3’,其扩增片段长度为585bp。采用β2actin作为内参照,其引物由上海博亚生物公司合成,上游序列为5’2TTCCAGCCTTCCTTCCTGG23’,下游为5’2ATTGCTCCTCCTGAGCGCAA23’,扩增片段长度为224bp。按50μl反应体系行PCR扩增。TagTMDNA聚合酶为TaKaRa产品。H
