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时间:2018-07-07
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1、大肠菌群及大肠杆菌测定 ——MPN法检验流程(FDABAM)1、检样50g+450ml稀释液2、适当十倍稀释样品3、选择3个适宜的连续稀释度的样品稀释液,每个稀释度接种三管LST肉汤(每管9mlLST肉汤并加有导管),每管接种1mL。在35℃下,培养24±2h~48±2h。4、(1)没有产气管→报告阴性(2)有产气管:①接种BGLB肉汤管→查MPN表报告结果(大肠菌群) ②接种EC肉汤→在44.5±0.5℃(水浴培养)24±2h~48±2h。
2、 →产气管接种EMB平板(35℃、18~24h),从EMB平板上挑取5个可疑菌 转接到PCA斜面,进行革兰氏染色、IMVC生化鉴定、接种LST复检产气 →查MPN表报告结果(大肠菌群)。 大肠菌群测定——MPN法检验几点说明MPN检索表: MPN检索表只给了三个稀释度,如改用不同的稀释度,则表内数字应相应降低或增
3、加10倍。初发酵和证实试验: 1)两步法进行了两次乳糖发酵试验。初发酵和证实实验所用培养基不同,但都是为了证实培养物是否符合大肠菌群的定义,即“在37℃分解乳糖产酸产气”。 2)初发酵阳性管,不能肯定就是大肠菌群细菌,经过证实试验后,有时可能成为阴性。有数据表明,食品中大肠菌群检验步骤的符合率,初发酵与证实试验相差较大。因此,在实际检测工作中,证实试验是必需的。产气量与倒管: 在乳糖发酵试验工作中,经常可以看到在发酵倒管内极微少的气泡(有时比小米粒还小),有时可以遇到在初发酵时产酸或
4、沿管壁有缓缓上浮的小气泡。实验表明,大肠菌群的产气量,多者可以使发酵倒管全部充满气体,少者可以产生比小米粒还小的气泡。如果对产酸但未产气的乳糖发酵如有疑问时,可以用手轻轻打动试管,如有气泡沿管壁上浮,即应考虑可能有气体产生,而应作进一步试验。大肠杆菌测定——EMB选择性分离鉴别EMB平板典型大肠杆菌菌落特征: 中心黑色或紫红色,有或无绿色金属光泽大肠杆菌测定——EMB选择性分离鉴别EMB是一种弱选择性培养基,一些球菌也可在该培养基上生长;l高压灭菌可使得美
5、蓝还原从而使培养基的颜色呈不均一橘黄色,轻轻摇动培养基可以恢复原有的正常紫色,倾注平板前应先摇匀;大肠杆菌在该培养基上并不一定总是呈现绿色的金属光泽;该培养基受可见光易使其中的成分氧化,储存及培养细菌时都应在避光条件。 大肠杆菌测定——革兰氏染色基本步骤:将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染液,染1min,水洗;滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗;滴加95%乙醇脱色约15~30s,直至染色液被洗掉,不要过分脱色,水洗;滴加番红复染液,复染1min,水洗、待干、镜检。结果:革兰氏阳性菌呈紫色,革兰氏阴
6、性菌呈红色。
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