红曲菌株的rapd多态性分析论文

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1、红曲菌株的RAPD多态性分析论文丁红梅葛尔宁王泽时【摘要】［目的］研究红曲分离株的遗传多样性和亲缘关系，为种质鉴定、保护和利用提供参考。［方法］用随机引物对10个红曲菌株进行RAPD分析，从中筛选出63特征性好，多态性高的RAPD图谱，用NTSYSPC2.1软件进行同一性和差异性分析并根据遗传距离构建系统进化树。［结果］红曲分离株间的同一性平均73.32%，表明它们的遗传背景具有很大的相似性；RAPD聚类结果与菌株的形态差异相关，表明RAPD分子标记进行菌株鉴别与传统形态分类鉴别结果基本一致，

2、鉴别能力较强。［结论］基于RAPD多态性的遗传分析能从分子水平上揭示红曲菌的遗传背景差异.freelplasmresources.［Methods］paringtheresultsoftherandomamplifiedpolymorphicDNA(RAPD)fingerprintsderivedfrom10cultivatedstrainsofMonascus,63RAPDelectrophoresisatlasesongthembyNTSYSPC2.1softethod.［Results］

3、Itorphologicstudy,sotheRAPDmolecularmarkertechnologyisaneffectiveplasmoriginandevolution.Keyaltextractagar）［6］培养基。1.1.2主要试剂及随机引物：主要分子生物学试剂购自杭州博日科技有限公司及宝生物工程（大连）有限公司，RAPD分析所用1O碱基随机引物S251S350、S2001S2050购自上海生工生物技术公司，编号及核苷酸序列见上海生工生物技术公司网页。1.2实验方法1.2.1红曲

4、基因组DNA的提取：红曲菌体基因组DNA的提取采用CTAB法［8］进行。1.2.2RAPD反应体系：RAPD反应体系为1×PCRBufer，dNTPs1mmol／L，Taq酶1.2U，随机引物0.2μmol／L，模板DNA20ng，反应总体积为20μL。1.2.3RAPD反应参数：扩增反应在梯度PCR扩增仪上进行，94℃预变性6min，进入92℃变性40s、36℃退火40s、72℃延伸2min的35个循环，最后72℃补平7min，4℃终止反应。1.2.4RAPD多态性分析：根据片段大小排列并记录,

5、条带有计为“1”;条带无计为“0”，构建原始数据01矩阵，用NTSYSPC2.1软件计算出同一性和差异性，并用clustering中的UPGMA聚类方法构建系统进化树；用Editfile生成遗传同一性和差异性表。2结果2.1红曲菌的RAPD电泳图谱：用150条随机引物扩增10株红曲菌基因组DNA，筛选出条带多，特征性好，多态性高的63个电泳图谱作为RAPD分析依据。不同红曲分离株RAPD扩增产物有3～9条带，多集中在300～1500bp，其中主条带2～4条，次带丰富，各菌株间既有相同条带又有

6、差异条带，如图1。2.2RAPD多态性分析：从选出的63个RAPD图谱发现,10株红曲菌指纹图谱条带基本一致,说明其遗传背景有很大相似性，但个别谱带之间存在不同程度差异，说明不同红曲分离株间又有丰富的遗传多样性。统计记录电泳结果，获得344条电泳条带的01矩阵。用NTSYSPC2.1计算10株红曲分离株遗传同一性和遗传差异性见表1，红曲分离株间同一性为36.05～86.05%,平均73.32%。聚类分析结果见图2，其中AS3.544与B、S与Z：Marker；1：AS；3.554；2：AS3

7、.972；3：B；4：F；5：J；6：M-2；7：P；8：S；9：Z.ruber种而AS3.554、B等则属M.anka种。这表明RAPD指纹图谱能较好地反映红曲菌株间的遗传关系，鉴别能力较强。均分离自福建的AS3.972和古田有地理距离优先聚类倾向,同一性高达86.05%，遗传距离非常近，表明地缘关系也是系统分类、遗传进化重要影响因子。本研究利用分子生物学和数值分类方法研究红曲菌种质资源，从分子水平揭示红曲菌遗传背景差异，其结果与传统分类结果基本一致，表明RAPD分析具有较强菌株鉴别能力，不仅可

8、作为一种辅助鉴别工具提高鉴定的准确性和客观性，而且为进一步研究红曲种质起源和进化提供参考。【