肿瘤抗原负载dc激活的ctl对裸鼠移植瘤作用的研究

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1、肿瘤抗原负载DC激活的CTL对裸鼠移植瘤作用的研究：王雪峰，张莉，杜晓媛，梁雯，远洋【摘要】目的研究负载人喉癌细胞系Hep-2冻融抗原的树突状细胞(DC)体外活化的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在裸鼠Hep-2移植瘤发生、发展中的作用。方法以健康人外周血贴壁单核细胞体外诱导DC并负载Hep-2冻融抗原，经MTT法检测其激活的同基因型T淋巴细胞在体外对Hep-2的杀伤活性后，将此Hep-2特异性CTL预防性接种于裸鼠皮下(预防组6只，对照组16只),3天后接种Hep-2，观察其移植瘤的发生率：再将此C

2、TL分以1次、2次治疗性接种于已荷瘤裸鼠皮下(对照组6只;治疗组和加强治疗组各5只)，观察移植瘤的生长情况。结果预防组Hep-2移植瘤的发生率明显低于对照组(预防组33%，对照组00%，P=0.0002);治疗组与加强治疗组裸鼠荷瘤体积明显小于对照组(P<0.05，P<0.01)，且加强治疗组裸鼠荷瘤体积明显小于治疗组(P<0.05)。结论负载Hep-2冻融抗原的DC活化的CTL不仅能预防裸鼠Hep-2移植瘤发生而且能抑制其移植瘤的生长。【关键词】树突状细胞;肿瘤免疫治疗;喉癌;

3、裸鼠　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofthecytotoxicTlymphocyte(CTL)activatedbydendriticcell(DC)loadedanlaryngealcarcinomacelllineHep-2lysatesontheHep-2implantedtumoroccurrenceanditsgroice.MethodsInvitroDConocyteisolatedfromhumanperipheralbloodmononuc

4、learcellsandloadedHep-2tumorlysates.AlsoinvitrotheefficacyofkillingHep-2cellphocyteactivatedbyDCinedthroughMTT.InvivothetumoroccurrencerateofnudemicepreviouslysubcutaneouslyinjectedthespecificCTL(6fromprecautiongroup，16fromcontrolgroup)anditsgroongthe

5、16Hep-2implantedtumornudemicetreatedbyspecificCTLonceortcontrolgroup，5fromtreatmentgroupand5fromretreatmentgrouprespectively).ResultsI-1640(GIBCO公司)、20%胎牛血清(FBS)、2mmol/L谷氨酰胺、20mmol/LHEPE是(SIGMA公司)、lmmol/L丙酮酸纳、100U/mL青霉素、80U/mL庆大霉素：rhGM-CSF(华北制药厂)，rhIL

6、-4、rhIL-2(BIO公司)，rhTNF-α(EC公司);淋巴细胞分离液(天津)，尼龙毛(上海);四氮唑蓝盐(MTT)(华美生物公司);小鼠抗人CD83McAb(深圳裕盛佳公司)，S-P免疫细胞化学染色试剂盒(迈新生物公司)。Il640调整细胞浓度至1×107/mL，取5mL加入T-25塑料培养瓶，37℃，5%CO2孵箱培养2h后，吸除未贴壁细胞即获贴壁单核细胞，加入完全培养基、rhGM-CSF1000U/mL、rhIL-41000U/mL常规培养，每2d换液1次。第四天将细胞分为2组：负载组

7、另加Hep-2冻融抗原5×106/mL(抗原量以冻融前Hep-2细胞数计)、rhTNF-α200U/mL;未负载组不加冻融抗原，继续培养4d，收集悬浮细胞，部分用完全培养基重悬浮备用：余用小鼠抗人CD83McAb以S-P免疫细胞化学染色法鉴定。　　1.5CTL的体外诱导及活性检测　　取与DC相同的新鲜外周抗凝血，同上法用含20%FBS的RPMIl640调整单个核细胞浓度小于1×108/mL，注入自制的T细胞尼龙毛柱，37℃温育1h后用上述培养基冲洗出非粘附细胞即为T淋巴细胞;将其分与两组DC按10

8、：1的比例混合，加含IL-21000U/mL的完全培养基，37℃，5%CO2孵箱培养72h，分收集细胞(CTL)。用含10%FBS的RPMI-1640重悬细胞，将各效应细胞(负载组的特异性CTL、未负载组的非特异性CTL和单纯T细胞，5×104/孔)与靶细胞(处于对数生长期的Hep-2细胞5×103/孔)按效靶比10：1混合，置于96孔平底培养板中(0.2mL/孔);同时分设效应细胞(5×104/孔)与靶细胞(5×103/孔)平行对照孔(0.2mL/孔)，每组复设5孔，37℃，5%