早期糖尿病大鼠心肌nos系统与胶原纤维演变的实验

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1、早期糖尿病大鼠心肌NOS系统与胶原纤维演变的实验【摘要】目的：观察不同时期糖尿病（diabetesmellitus,DM）大鼠血清、心肌组织中NO、NOS水平及心肌胶原纤维的变化，探讨NO与心肌胶原纤维的相关性。方法：应用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射建立SD大鼠糖尿病模型，设立正常对照组（1个月、2个月和3个月）和模型组（1个月、2个月和3个月）。测定各组大鼠血清、心肌匀浆中的NO含量及NOS活性，利用VanGieson氏胶原纤维染色法观察各组大鼠心肌胶原纤维的变化。结果：DM大鼠血清、心肌中的NO、NOS水平较正常组显著降低（P<0.

2、05）并随着糖尿病病程的延长不断降低，心肌胶原纤维在糖尿病组明显增生，而且也随着病程的延长不断加重。结论：DM大鼠心肌胶原纤维的增生与细胞中NO及NOS水平的减少有关。【关键词】心肌病变一氧化氮（NO）糖尿病链脲菌素胶原纤维AbstractObjective:ToobservingthelevelsofNOandNOSandofbloodserumandcardiacmuscleindiabersmellitus,duringdifferentperiodsandstudythecorrelationbetuscle.Methods:SDra

3、tsalgroup(onemonth,tonthsandthreemonths)andmodalgroup(onemonth,tonthsandthreemonths).ModalratsusclebyVanGiesoncollgenfiberdye.Results:ThelevelsofNOandNOSinDMbloodserumandcardiacmuscledecreasenoticeablyparedtonormalgroups(P<0.05).groupsandcontinuetogroe.Conclusion:Theincr

4、easeofcollagenfibersincardiacmuscleisrelatedtothedropofthelevelsofNOandNOSincells.Keyyopathy(DC)；Nitricoxide(NO)；Diabetesmellitus(DM)；Streptozotocin(STZ)；Collagenfibers(CF)糖尿病心肌病变（diabeticcardiomyopathy,DC）是糖尿病常见的一种并发症，临床表现为心力衰竭，心律失常，心源性猝死，是糖尿病主要死亡原因之一。近年来的研究发现胶原纤维增生是引起糖尿病心

5、肌病变的原因之一。已往对胶原纤维的研究多在缺血再灌注方面，而NO对胶原纤维的影响方面研究的较少，因此，我们就这方面进行了研究，现报导如下。1材料与方法1.1材料1.1.1药物与试剂：链脲佐菌素（美国SANLAN),NO、NOS试剂盒（南京建成生物工程研究所）、三氯化铁（上海星山化工厂）、苏木精（上海化学试剂公司进口分装）、苦味酸（上海化学试剂公司）、酸性品红（上海新中化学厂）。1.1.2动物：SD雄性大鼠42只，体重180g～200g由福建医科大学实验动物中心提供,合格证号：闽物质检号（2002-2006）。1.2方法1.2.1动物分组与模型

6、：SD雄性大鼠42只适应性喂养1g/kg，72h后尾静脉采血测定血糖，血糖大于16.7mmol/L者为糖尿病模型动物。成型模型组分为三组①糖尿病1个月组②糖尿病2个月组③糖尿病3个月组（按250mg/kg，1次/d灌胃）各7只（糖尿病3个月死亡1只，糖尿病1个月死亡1只）。各组大鼠均以颗粒饲料喂养，自由进食、饮水。1.2.2取血和制备心肌匀浆：分别在1个月、2个月和3个月后取各组大鼠6只静脉取血置于4℃冰箱冷藏待测，用乌拉坦（按1g/kg）麻醉处死，迅速取心肌组织置于4℃预冷生理盐水洗净血液，用滤纸吸干水份后称重，以4℃生理盐水制成10%匀浆

7、，4℃下3000r/min离心15min，取上清液置于4℃冰箱冷藏待测。1.2.3血清和心肌组织中NO、NOS的测定：NO用硝酸还原酶法测定，NOS用化学比色法测定，蛋白质用考马斯亮兰法测定。测定步骤按试剂盒说明严格操作。1.2.4VanGieson氏胶原纤维染色：用乌拉坦（按1g/kg）麻醉处死大鼠后，迅速取各组大鼠心肌组织用4℃预冷生理盐水洗净血液后用10%甲醛固定，经脱水、包埋后切片以VanGieson氏胶原纤维染色后在光镜下观察胶原纤维。1.2.5统计学处理：实验数据以（x±s）表示，组间比较用单因素方差分析（one-waySNOVA

8、），所有数据采用计算机软件SPSS10.0统计分析。2结果2.1血清中NO含量及NOS活性的测定正常组三个组血清中NO含量及NOS活性几乎不改变（P>0.05