腐败肝脏中氯氮平的高效液相色谱分析方法研究

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1、腐败肝脏中氯氮平的高效液相色谱分析方法研究【摘要】目的建立腐败肝脏组织中氯氮平的高效液相色谱分析方法。方法采用hypersilods柱(150mm×4．6mmid，5(m)，流动相为甲醇：水(80：20)，内含0．025mo[／l的磷酸二氢钠和0．01mo[／l的十二烷基磺酸钠(sds)(ph5)。检测波长为：222nm，228nm和259nm。结果用该方法从腐败肝脏组织中检出氯氮平。结论所建立的高效液相色谱分析方法适用于腐败生物检材中氯氮平的检识，能为法医鉴定工作提供方法。【关键词】氯氮平；腐败肝脏；hplc【中图分类号】i

2、3919．1；r927．1【文献标识码】a【】1007—9297(2004)02—0131—02studyondetectionofclozapineindecayliverusinghplc．liaolin—chuan，yanyou—yi，yanglin．sichuanuniversi—ty，chengdu610041【abstractl0bjectiveforthepurposesofdetectingclozapineindecayliver．methodsahplcmethodplesn(4．6mmi．d．×150mm

3、)elutedethanolol／lnah2po4and0．olmol／lsds(ph5)．asequentialultravioletdetection)．resultsclozapineples．conclusionthemethodinthisstudyisusefulintheforensiccasesinvolvedclozapinepoison．【keyple；hplc氯氮平(clozapine)，化学名为8一氯一11一(4一甲基一1一哌嗪基)一5h一二苯并[b，e]一[1，4]二氮杂卓，是一种抗精神病药，主要用于

4、治疗精神分裂症，由于其具有较高的抗精神分裂症疗效，又很少产生锥体外系反应，故在临床上得到广泛应用。¨关于氯氮平的检测方法，国内外有学者已对血浆及血清等机体组织中该药的检测方法进行了研究，_2但尚未见到肝脏组织尤其是腐败组织中该药物检测方法的报道。本文对腐败肝脏组织中该药物的检测作了尝试，报道如下。仪器及材料一、仪器hp1100series高效液相色谱仪，配以二极管阵列检测器，四元泵及三维hp液相色谱化学工作站；日本岛津uv一260紫外分光光度计；高速台式离心机(17000r／min)。二、对照溶液及试药精密称取氯氮平对照品，配

5、制成对照品乙醇溶液，浓度0．01mg／ml；甲醇，购自fisher公司；水为超纯水(电阻(18mo)；其他试剂、试药均为色谱纯或分析纯。三、材料空白对照人肝组织，放至腐败；精神病患者腐败肝组织，生前服用过氯氮平。方法及结果一、样品前处理方法一，取腐败肝脏组织检材5g，用氨水调节ph为8，先后用乙醚10ml，5ml振摇萃取两次，分出乙醚层，合并滤液，过三氧化二铝净化柱净化，乙醚液用酸性水液反提，酸水提取液经碱化后再用乙醚提取；置乙醚提取液于40℃水浴中，挥干溶剂，残留物用甲醇溶解，16000rpm离心5min后取上清液进样hpl

6、c仪。方法二，提取溶剂换用氯仿，余同上法，挥干溶剂时用空气流吹干。二、色谱流动相的筛选本文选用odshypersil柱(150mm×4．mmid，5m)为分析柱；同样填料(30t~m)短柱为预柱。先用已知对照品直接进样，对下列流动相进行了筛选：(1)不同比例的甲醇与水溶液；(2)甲醇：水：磷酸二氢钠：十二烷基磺酸钠的不同配比溶液，ph分别为4．12全文查看5、5．0、5．5、6．2、7．0(浓磷酸调节)。结果表明流动相为甲醇：水(80：20)，内含0．025mol／l的磷酸二氢钠和0．01mol／l的十二烷基磺酸钠(ph5)，

7、氯氮平有适合的保留时间，且峰形较好，拖尾因子最接近1(见图1a)。在随后用生物样品进样情况下仍能获得较满意的结果，见图1(b)(c)。流速：1．2ml／min；检测波长：222nm，228nm，259nm；柱温：30℃。用上述乙醚和氯仿提取的样品进样，比较两种提取溶剂杂质的干扰情况。讨论一、样品前处理方法由于腐败肝脏组织中所含成分较复杂，所以本文采用有机溶剂提取，过净化柱和酸性水液反提净化，酸水液经碱化后再用有机溶剂提取；于40℃水浴中挥干溶剂，残留物用甲醇溶解．16000rpm离心后上清液进样hplc仪；虽然操作步骤略多，但

8、却能明显降低检材中的内源性杂质对检测的干扰。腐败肝脏组织经以上预处理后，取20i~l进样测定，并通过阵列二极管搜集220～350nm紫外光谱图，两种萃取条件下均能检出氯氮平，从图1(b)(c)可见在两种溶剂提取回收率接近，但用乙醚提取杂质峰更少。样品前处理过程中，用氨水调节p