健康家兔服用大川芎丸后体内阿魏酸的药代动力学研究论文

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1、健康家兔服用大川芎丸后体内阿魏酸的药代动力学研究论文【摘要】目的建立健康家兔服用大川芎丸后血清中阿魏酸（FA）的高效液相色谱测定法（HPLC），并研究阿魏酸在大鼠体内的药代动力学。方法用HPLC法，色谱柱为InertsilODS-3（5μm，4.6×250mm），流动相为：甲醇∶水∶冰乙酸（49∶50.745∶0.255，V/V），流速1.0mL·min-1，检测波长322nm。FA用内标（香豆精）法定量。结果FA的最低检测限为0.25ng.freelL-1（S/N3），线性范围是26.4～4224ng·mL-1，r=0.9999.平均加样回收率为98.17％±1.

2、26％.结论该方法灵敏、快速、简便、专一性和重现性好，可用于阿魏酸血药浓度分析及药代动力学研究。【关键词】大川芎丸阿魏酸血清家兔HPLCPharmacokiicsofFerulicAcidinRabbitafterAdministeringDACHUANXIONGethodsInertsilODS-3（5μm，4.6×250mm）ethanol-in-1，.TheCoumarinitofFAL-1，L-1，r=0.9999.ThemeanrecoveryrateofFAethodissensitive,fast，simple，specificandreproduci

3、ble.ItcanbeusedtotheanalysisofFAinserumandthestudyofpharmacokiics.Key；rabbit；HPLC收稿日期２００８－０１－３０修回日期２００８－０２－２８基金项目国家973项目：方剂现代科学研究—方剂作用机理与物质基础的研究，项目编号G1999054402.作者简介王兴(１９７３－）男，成都市人，教授，博士后。主要研究方向：中药多靶点药理基因表达差异谱及中药新药研究。E-mail:p68.9℃～70.0℃，购于中国医药公司北京采购供应站；大川芎丸标准提取物１号样（川芎∶天麻＝4∶1，0.867g膏/g生

4、药），由中国中医研究院中药所提供；醋酸、甲醇、冰乙酸均为AR级，水为双重蒸馏水。1.3实验动物健康成年家兔，体重2.3kg～2.9kg，雌雄各半；由第四军医大学实验动物中心提供。1.4标准溶液的配制定性用FA标准溶液的配制：用电子天平精密称取4mgFA标准品，置一10mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微量移液器吸取10μL置于1.5mL离心管中，用甲醇稀释至1000μL，摇匀，即标准液浓度为4ng·μL-1。制作标准曲线用FA标准溶液及内标香豆精溶液的配制：精密称取FA6.6mg于50mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度为母液1（132μg·mL-1）。母液

5、1稀释10倍后为母液2（13.2μg·mL-1），母液2稀释10倍为母液3（1.32μg·mL-1）。精密称取香豆精5.03mg于100mL棕色容量瓶中，加0.3mL甲醇助溶后用双蒸水稀释至刻度（50.3μg·mL-1）为母液4.上述配制好的标准溶液密封后置4℃冰箱待用［2］。1.5色谱条件色谱柱：InertsilODS-3（5μm，4.6×250mm）；流动相：甲醇∶水∶冰乙酸（49∶50.745∶0.255，V/V）；流速1.0mL·min-1；检测波长：322nm；进样量：20μL.1.6样品预处理及测定用微量移液器精密吸取0.5mL空白兔血清置于一干净的5m

6、L玻璃具塞锥形离心试管中，加入30μL蒸馏水，再加入100μLFA（4ng·μL-1）标准液，加入10μL香豆精内标液，涡旋混匀15s，100℃水浴10min，用超微型搅拌器搅拌1min制成匀浆，置低速离心机中离心20min，3500r/min，吸取上清液后再加入等量甲醇，涡旋混匀15s，用氮气流吹干，再加300μL甲醇复溶，置台式高速离心机中离心5min，10000r/min，吸取上清液，取20μL直接进行HPLC测定［3～5］，以峰面积进行定量分析。2结果2.1方法学研究在本色谱条件下，阿魏酸、内标香豆精与血清中的杂质峰均作到基线分离，与血清峰无重合，样品峰与杂

7、质峰的分离度＞1.5，见图1.2.2血清中阿魏酸标准曲线的制备及其最低血清检测浓度的测定于8支尖底离心试管中分别加入不同的FA标准液，分别精密加入0.5mL空白兔血清，制成含FA分别为0.00ng·mL-1、26.4ng·mL-1、52.8ng·mL-1、105.6ng·mL-1、211.2ng·mL-1、1056ng·mL-1、2112ng·mL-1、4224ng·mL-1的血清标准液，摇匀后按样品预处理项下操作测定（n=6），以FA与内标面积之比对应浓度进行回归，线性范围是26.4～4224ng·mL-1，进样量为20μL.得回归方程［6，7］：Y=1350