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1、组胺对肺上皮细胞Toll样受体表达的上调作用：侯一峰，周艳春，郑晓璇，王海燕，傅意玲，方泽曼，何韶衡【关键词】组胺；肺/细胞学；上皮细胞；Toll样受体【Abstract】AIM:ToinvestigatetheupregulatoryeffectofhistamineonTolllikereceptor(TLR)expressioninpulmonaryepitheliacells.METHODS:TLR1TLR10mRNAexpressionsinedbyRTPCRinrestingA549cells,andbyr
2、ealtimequantitivePCRinthecellsfolloulationineatvariousconcentrationsandatvariousperiodsoftime.Furthermore,theupregulatoryeffectofhistamineonTLR3inedbyfloetry.RESULTS:TLR1TLR10mRNAinesignificantlyenhancedTLR3expressionatbothmRNAandproteinlevelsinaconcentrationand
3、timedependentmanner.ThiseffectofhistamineineinA549cells,inecanenhancethesensitivityofpulmonaryepitheliumtovirusinfectionine,lung/cytology;epithelialcells,Tolllikereceptor【摘要】目的：观察组胺对肺上皮细胞中Toll样受体（TLR）表达的影响.方法：体外培养人肺上皮细胞株A549，用RTPCR和实时定量PCR检测静息状态或组胺作用下的A549细胞中TLR
4、1～TLR10mRNA的变化，并用流式细胞术进一步确定组胺对TLR3表达的调节作用.结果：A549细胞有TLR1～TLR10mRNA的组成型表达，组胺对TLR3mRNA和蛋白的上调作用具有时间和剂量依赖性，并且H1受体阻断剂可抑制组胺对TLR3的上调作用.结论：组胺可上调肺上皮细胞中TLR3的表达，提示当呼吸道存在变态反应性病变时，增多的组胺可能会增加肺上皮细胞对病毒感染的敏感性.【关键词】组胺；肺/细胞学；上皮细胞；Toll样受体呼吸道病毒感染是支气管哮喘急性发作的一个重要诱因［1］，而有关哮喘急性发作时呼吸道对病原
5、菌感染的敏感性及其机制目前尚不清楚.Toll样受体（Tolllikereceptor,TLR）是一类在天然免疫识别中具有重要作用的模式识别受体，目前在人体内至少已发现TLR家族中的10个成员(TLR1～TLR10).TLR广泛表达于各类组织细胞中，且许多炎性介质可影响TLR的表达［2］.组胺是一种在支气管哮喘中发挥重要作用的介质，有研究显示：组胺可上调血管内皮细胞中TLR2和TLR4的表达［3］.本研究旨在通过观察组胺对肺上皮细胞中TLR表达的影响，探讨哮喘急性发作与呼吸道感染之间的关系.1材料和方法1.1材料人肺上皮
6、细胞株A549购自美国ATCC(AmericanTypeCultureCollection)，胎牛血清、DMEM培养基购自Hyclone公司.TRIzolRNA提取试剂、ProofStartDNA聚合酶和QuantiTetTMSYBRGreenPCRKit购自Invitrogen公司,RNA酶抑制剂和MMLV逆转录酶均购自Promega公司.人TLR1～TLR10及βactin的PCR引物由上海生工生物工程公司合成.PCR产物回收试剂盒购自上海生工生物工程公司.FITC小鼠抗人TLR3mAb（IgG1，40C1285）
7、购自Imgenex公司，FITC小鼠IgG1同型抗体购自ChemicanInternational公司.组胺、盐酸苯海拉明购自Sigma公司.1.2方法1.2.1细胞培养A549细胞用含100mL/L胎牛血清的DMEM培养基,于37℃,50mL/LCO2的培养箱中培养,每2～3d传代1次,所有试验均使用对数期细胞.1.2.2RTPCR检测A549细胞在静息状态下TLR1～TLR10mRNA的表达当在25cm2培养瓶中的A549细胞达到80%～90%以上的融合状态时,改用不含血清的DMEM继续培养12h.在去除培养瓶中的
8、DMEM后，按Trizol试剂盒说明书的步骤提取总RNA.按MMLV产品说明书推荐的方法合成cDNA第一条链.PCR反应体系为：取cDNA3μL,25mmol/LMgCl24μL,10mmol/LdNTP1μL,10×缓冲液5μL,TaqDNAPolymerase2.5U,5μmol/L的上游引物和下游引物各5μL，用去离子水将总
