葛根素对肝硬化大鼠肝脏缺血再灌注损伤保护作用及其保护机制的研究论文

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1、葛根素对肝硬化大鼠肝脏缺血再灌注损伤保护作用及其保护机制的研究论文.freell/100g体重60%CCl4大豆油溶液，每隔3天1次，第4次后间隔7天注射第5次（可减少大鼠死亡率），第5次起剂量改为0.3ml/100g体重40%CCl4大豆油溶液，每隔3天1次，共13次；除注射CCl4当日外，每日1次60%食用酒灌胃，乙醇剂量0.4g/100g体重；给予正常饮水；以高脂低蛋白饲料喂养。上述操作第6周末停止，继续观察至8周末大鼠肝硬化模型制备成功并趋于稳定。第2周起每周末行B超定位肝穿刺病理检查，8周末挑选肝

2、硬化程度趋于同一水平大鼠128只，继续进行下面试验。1.3.2动物分组按随机数字表法，将128只大鼠随机分为4组，每组再分为4个时间亚组，每亚组8只大鼠。4组分别为A组：假手术组；B组：单纯缺血再灌注组；C组：缺血预处理组；D组：葛根素预处理组。4个时间亚组分别为a亚组：缺血前时间亚组；b亚组：缺血再灌注后1h时间亚组；c亚组：缺血再灌注2h时间亚组；d亚组：缺血再灌注6h时间亚组。1.3.3缺血再灌注模型的制备术前禁食12h，自由饮水。以戊巴比妥钠3mg/100g体重腹腔注射麻醉后开腹并充分显露肝门，游离

3、门静脉及肝固有动脉，用无损伤动脉钳给予钳夹，30min后移去动脉钳复灌60min，形成全肝I/R模型。C组于缺血前反复3次缺血5min再灌注5min形成缺血预处理模型及术前D组12h、1h分别2次分别给予Pue10mg/100g体重，其他各组给予等量生理盐水，再行缺血30min，再灌注60min，D组形成葛根素预处理模型。1.3.4标本采集B、C、D组动物在再灌注0h（即缺血前）、再灌注1h、2h、6h后分别从各时间亚组大鼠心内取血5.0ml，不加抗凝剂静置2h，并标明分组及动物编号，用自动平衡离心机离心，

4、取部分血清测定ALT、AST的含量，其余的置入-70℃冰箱内待测定NO、SOD、MDA。取血后快速取右肝组织进行HE染色光镜观察；其他肝组织取0.5g制备10%组织匀浆，检测其中NO、SOD、MDA及TNF-α。A组亦在相对应的时间点取血及肝组织行上述检查。在实验完毕时处死动物。2结果2.1病理结果各组低倍镜下均可见肝小叶结构紊乱，肝小叶重建，可见纤维再分隔现象，肝内假小叶广泛形成，同时伴有明显的肝细胞结节状再生等肝硬化病理表现。A组：除上述表现外未见其他异常。B组：高倍镜下可见肝细胞核边聚、浓缩及溶解，胞

5、浆疏松化，并可见嗜酸性浸润；肝窦明显狭窄，可见大量的红细胞淤积其内并有微血栓形成、中性粒细胞贴壁等。C组：高倍镜下可见肝细胞核边聚、浓缩及溶解，胞浆疏松化，但较B组显著减轻；肝窦狭窄较轻，但仍有红细胞淤积及微血栓形成现象，炎性细胞浸润减少。D组：高倍镜下仅偶见核边聚，胞浆疏松化；肝窦无明显狭窄，内无明显红细胞淤积，及其微血栓形成等，汇管区炎性细胞浸润不明显。2.2血清及肝脏组织匀浆检验结果2.2.1各组大鼠肝功酶学指标变化D组肝功酶学检验缺血前与其他各组无明显差异（P＞0.05），再灌注后各时间点明显降低B

6、组（P0.05），与C组无显著差异（P＞0.05），C、D组再灌注6h时较B组ALT、AST显著降低（P0.05），但与A组相比未完全恢复正常（P0.05），见表1。表14组大鼠灌注后各时间点血清ALT、AST的变化（x±s，u/L）注：与A组同时间点相比，▲P0.05；与同组灌注缺血前即0h时相比，△P0.05；与B组同时间点相比，*P0.052.2.2各组大鼠血清NO含量变化C、D组血清NO与再灌注1h、2h含量较缺血前有所降低，但较B组下降幅度小（P0.05）。再灌注6h时C、D组恢复正常与A组差异无

7、显著性（P＞0.05）；而B组含量明显升高，且高于A组（P0.05），见表2。表24组大鼠灌注后各时间点血清NO的变化（x±s，μmol/L）注：与A组同时间点相比，▲P0.05，与同组灌注缺血前即0h时相比，△P0.05，与B组同时间点相比，*P0.052.2.3各组大鼠血清SOD活性及MDA的含量变化D组SOD活性与C组各时间点无明显差异（P＞0.05），明显高于B组（P0.01），再灌注1h时较A组降低（P0.05），灌注后6h时与假手术组差异无显著性（P＞0.05）。血清MDA含量，缺血再灌注1h、

8、2h时C、D组较A组有所增高，但增高程度明显低于B组（P0.05），再灌注6h时，D组与A组比较差异无显著性（P＞0.05）。各组大鼠各时间点的血清SOD、MDA含量变化见表3。表34组大鼠灌注后各时间点血清SOD、MDA的变化（x±s）注：与A组同时间点相比，▲P0.05；与同组灌注缺血前即0h时相比，△P0.05；与B组同时间点相比，*P0.052.2.4各组大鼠缺血再灌注后1h时肝脏中NO、MDA、TNF-