葎草多糖的超声提取及抑菌活性研究论文

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1、葎草多糖的超声提取及抑菌活性研究论文【摘要】目的优化葎草多糖的超声辅助提取工艺，并研究其抑菌活性。方法以多糖中的葡萄糖含量为指标，对超声波功率、料液比和超声时间进行L9（34）正交实验，确定超声辅助提取葎草粗多糖的最佳工艺。用DE-52交换柱对葎草粗多糖进行分离，以滤纸片法研究葎草粗多糖和多糖分离组分的抑菌能力。结果以水为提取溶剂，料液比1∶28（g/ml），超声功率120ethodsTakingthecontentofglucoseasobservationindex,izedtheextractionprocessbyL9（3

2、4）orthogonalexperiment.TheHumulusscandenspolysaccharides(HSP)atographyeansoffilterpaper.ResultsTheoptimalextractionconditionsl,120err.又名拉拉藤，拉拉秧，一年生或多年生草本植物，全国各地几乎均有分布。葎草生长旺盛，富含营养，既可以作为饲料，提高饲喂动物的生长状况，又可以药用，有清热解毒、利尿消肿之功效［1］。据文献报道，葎草中含有木犀草素、葡萄糖苷、胆碱、挥发油、鞣质、树脂、天门冬酰胺等物质［2］，

3、其提取物具有抗结核菌的功效［3］，因而渐渐引起人们的研究兴趣。近年对于葎草中的木犀草素、黄酮类物质的提取已有少量研究［4，5］，但对葎草中多糖类物质的提取和活性研究还未见报道。本文采用超声波辅助提取方法制备葎草总多糖，并对多糖的抑菌活性进行研究，以期为这一优势植物资源的开发利用提供一定的理论依据。1材料与仪器1.1材料葎草，采自江苏科技大学校园内，晾干后粉碎过100目筛，干粉于干燥器中密封保存。大肠杆菌Escherichiacoli、金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus、苏云金芽孢杆菌Bacillusthurin

4、giensis、链球菌Streptococcus，由本校生物与环境工程学院微生物实验室提供。牛肉膏蛋白胨培养基（牛肉膏3.5g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g，琼脂20.0g，水1000ml，pH7.0～7.2，121℃灭菌30min）。1.2试剂葡萄糖、硫酸、苯酚、活性炭、乙醇、牛肉膏、蛋白胨等，均为国产分析纯。1.3仪器UV-9100紫外分光光度计，KQ5200DB型数控超声波清洗器，FA2104型电子精密天平，AvantiJ-25高效大容量冷冻离心机（Beckman），DHG-9203A型电热恒温鼓风干燥箱，瑞士Buch

5、i旋转蒸发浓缩仪，Hl后离心，上清液加入95％乙醇醇沉；沉淀物蒸馏水复溶，10%三氯乙酸除蛋白；上清液活性炭脱色，透析袋透析后再次醇沉，沉淀依次用乙醇、丙酮洗涤，挥去残余水分，真空干燥，即得葎草粗多糖（HSP）干品。2.1.3粗多糖的分离纯化将70.0g二乙胺基乙基纤维素（DE-52）依次用500ml双蒸水、500ml0.5mol/L的氢氧化钠、盐酸、氢氧化钠处理，0.5h/次，不时搅拌，并用双蒸水处理至中性，装柱柱规格：2.5cm×30cm。精密称取HSP100.0mg上样，在室温下依次用0，0.2，0.4，0.8，1.0mol

6、／LNaC1溶液梯度洗脱，洗脱速度5.0ml/min，每管收集5.0ml。苯酚-硫酸法［6］跟踪检测，收集洗脱高峰部分，透析后减压浓缩，即得精制的葎草多糖组分。2.2多糖含量的分析方法2.2.1多糖含量的测定采用硫酸-苯酚法［6］。精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖20.0mg，置于100ml容量瓶中，蒸馏水定容为标准溶液。分别量取一定体积的标准溶液，配成浓度为0，10，20，30，40，50，60μg/ml的葡萄糖稀释液。精密吸取上述稀释液各1.0ml，置于10ml容量瓶中，加入5％的苯酚溶液1.0ml，摇匀后再加入浓硫酸5.0

7、ml，充分混匀后放置30min，冷却到室温后，在波长490nm处测定吸光度，绘制标准曲线（回归方程为Y=0.0111X-0.0141，r=0.9991）。2.2.2换算因子测定精密称取80℃干燥至恒重的纯化葎草多糖HSP-II10.0mg，加蒸馏水定容至50ml，配成葎草多糖储备液。苯酚硫酸法测定吸光度，测得其葡萄糖含量。换算因子=g），C为多糖储备液中葡萄糖质量（mg），D为多糖的稀释因素。实验测定结果换算因子为4.47。2.2.3多糖含量计算多糖含量(%)=（C×D×F/g），D为多糖溶液的稀释倍数，F为换算因子，g）。2.3

8、葎草多糖的抑菌活性［7，8］将供试菌种分别接种到装有培养基的试管内，进行扩大培养（37℃培养24h）。取活化好的菌种斜面，用无菌生理盐水配制成106个／ml的菌悬液，备用。抑菌作用的测定采用滤纸片法。将滤纸用打孔器打成直径为6mm的圆形小纸片，分装