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1、紫外分光光度法测定络石藤中总黄酮含量论文饶金华，刘文英，江佳峪【关键词】高效液相色谱法；,,淫羊藿多糖；,,衍生化；,,单糖摘要：目的测定淫羊藿多糖(EPS)中单糖的组成及其摩尔比。方法将淫羊藿多糖样品用1mol/L硫酸溶液降解成单糖后,用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生,通过简化衍生方法,优化分析条件,采用反相高效液相色谱250nm紫外检测和使用梯度洗脱,分离测定各单糖。结果淫羊藿多糖由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖6种单糖组成，其物质的量之比为0.60∶0.74∶1.00
2、∶0.29∶2.29∶1.43。结论该改进后的衍生化方法以及优化的高效液相色谱法具有简单、快速、重现性好等特点,可用于淫羊藿多糖中单糖组成的测定。关键词：高效液相色谱法；淫羊藿多糖；衍生化；单糖Abstract：ObjectiveTodeterminethemonosaccharidesintheEpimediumpolysaccharide(EPS)andtheirmolarratio.MethodsTheEpimediumpolysaccharideonosaccharidesol/Lsulfuricaci
3、d.Themonosaccharidederivativesobtainedethyl-5-pyrazolone(PMP)onitoredbyultravioletdetectorat250nm.ResultsSixmonosaccharidesderivativesediumpolysaccharideisposedofmannose,rhamnose,galacturonicacid,glucose,galactose,andarabonose,olarratioof0.60∶0.74∶1.00∶0.29∶
4、2.29∶1.43.ConclusionThismethodhasaccurateresultandgoodreproducibilityandcanbeusedtodeterminethemonosaccharidesinEpimediumpolysaccharide.KeyediumPolysaccharide;Derivation;Monosaccharide淫羊藿多糖(EPS)是从小檗科植物淫羊藿Epimedium中分离得到的一种酸性杂多糖，含量约占生品的2%［1］。淫羊藿多糖具有广泛的药理学活性，有免
5、疫调节作用以及刺激骨髓DNA合成、增强血小板聚集等作用［2］。目前有关淫羊藿多糖的研究报道大多为药理活性研究以及传统的硫酸-苯酚法、蒽酮-硫酸法测定含量［3］，其单糖组成迄今未见报道，而多糖的单糖组成分析是进行多糖质量控制和获取多糖基本信息的重要环节。多糖样品的单糖组成分析常用的方法包括薄层色谱法、气相色谱法和液相色谱法。薄层色谱法微量成分显色不明显而且重现性不好;气相色谱法操作繁杂、费时;液相色谱法操作简单快速。本实验采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生.freelStations色谱工作站
6、。1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP，甲醇重结晶两次，上海化学试剂采购供应站试剂厂）；乙腈(色谱纯,MERCK公司)。单糖对照品：葡萄糖（Glc，上海惠兴生化试剂有限公司）、阿拉伯糖（Arab，Sigma公司）、半乳糖（Gal，Amresco公司，北京经科公司分装）、鼠李糖（Rham，EnglandB.D.HLaboratoryChemicalsGroup）、甘露糖（Mannose，Supelco公司）、岩藻糖（Fuc，Fluka公司）、半乳糖醛酸（GalUA，Fluka公司），其余试剂均为国产分析纯。淫
7、羊藿多糖（EPS）由本实验室分离纯化,经紫外光谱分析,不含蛋白质和核酸类物质，红外光谱具有多糖特征吸收。2方法2.1色谱条件色谱柱为PhenomenexC18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为溶剂A，15%（V/V）乙腈+20mmol/L乙酸铵水溶液，溶剂B，40%（V/V）乙腈+20mmol/L乙酸铵水溶液；梯度模式：时间梯度为0min→25min，相应浓度梯度为0%→50%溶剂B。检测波长250nm；流速1.2ml/min；进样体积20μl;柱温为室温。2.2多糖的水解称取20mg淫羊藿多糖置于安
8、瓿管中,加入浓度为1mol/L硫酸溶液2.0ml,封管后于100℃水解6h,得水解样品溶液。用2mol/L氢氧化钠水溶液中和至pH值为7.0,并以纯化水稀释到5.0ml,离心,取上清液待衍生化。2.3单糖标准品的衍生化取浓度分别为1.0mmol/L的甘露糖(Man)、鼠李糖(Rham)、半乳糖醛酸(GalUA)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、阿拉伯糖(Arab)和内标岩藻糖(Fu
