原癌基因pik3ca在宫颈癌组织中的表达及意义论文

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1、原癌基因PIK3CA在宫颈癌组织中的表达及意义论文王洪艳崔竹梅刘湘萍隋爱华杨堃孙显路【摘要】目的研究原癌基因PIK3CA在宫颈癌组织中的表达及其意义。方法用RTPCR方法检测PIK3CAmRNA在15例正常宫颈组织和30例宫颈癌组织中的表达,免疫组化方法检测其蛋白在50例宫颈癌前病变组织及20例宫颈癌组织中的表达情况。结果从宫颈上皮内瘤样病变(CIN)到宫颈癌的发展过程中，PIK3CA的蛋白表达产物PI3Kp110a蛋白表达水平逐渐增加(Hc=9.968,P0.05)；PIK3CAmRNA在宫颈癌组织和正常宫颈组织中的表达差异有显著性(t=2.672,P0.05)。结论

2、PIK3CA基因改变与宫颈癌的发生发展有关，宫颈癌的发展过程伴随着PI3Kp110a蛋白的表达异常。【关键词】宫颈肿瘤；宫颈上皮内瘤样病变；原癌基因蛋白质PIK3CA；免疫组织化学［ABSTRACT］ObjectiveToexploretheexpressionofprotooncogenePIK3CAincervicalcanceranditssignificance.MethodsTheexpressionsofPIK3CAmRNAinnormalcervicaltissue(15cases)andcervicalcancertissue(30cases)munoc

3、hemistry.ResultsTheexpressionsofPIK3CAmRNAalcervixandcervicalcancer(t=2.672,P0.05).IntheprocessfromCINtocervicalcancer,thePIK3CAproteinproducts(PI3Kandp110a)increaseddramatically(Hc=9.968,P0.05).ConclusionThechangesofPIK3CAgeneisrelatedtothemorbidityofcervicalcancer,theprocessofthecanceri

4、sfollos;Cervicalintraepithelialneoplasia;ProtooncogeneproteinsPIK3CA;Immunohistochemistry宫颈癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，流行病学研究显示，宫颈癌的发生与人乳头瘤病毒（HPV）感染关系密切。生育期妇女中HPV感染非常普遍，然而只有一小部分妇女发生宫颈癌,因此,除了HPV感染以外宫颈癌的发生还存在其他的必要因素。与其他肿瘤一样，宫颈癌的发生也被认为是与癌基因激活或抑癌基因失活有关的多步骤的发展过程1。PIK3CA，编码磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）的p110a亚基.freelo

5、l/L柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）中,微波炉加热至95℃共10～15min进行抗原修复,按照试剂盒说明书依次滴加一抗、通用型二抗,最后切片经梯度乙醇脱水,干燥,二甲苯透明,中性树胶封固,显微镜观察结果。结果判断：用已知的阳性对照片作阳性对照，以PBS液代替一抗作阴性对照。PI3Kp110a蛋白阳性染色位于胞浆。高倍镜下随机选4个视野，结合阳性细胞百分率和染色强度进行半定量分级，然后取平均值。染色强度判定标准如下：胞浆内无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞百分率判定：阳性细胞百分率5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75

6、%为3分，＞75%为4分。两项结果相加＜2分为阴性(-)，2～3分为弱阳性(+)，4～5分为中度阳性()，6～7分为强阳性()。1.3PIK3CAmRNA表达水平的检测1.3.1总RNA提取及逆转录按Trizol试剂（购自Invitrogen公司）说明书提取组织总RNA，并测定RNA纯度，按照MMLV反转录试剂盒（购自Promega公司）推荐的50μL体系进行逆转录反应，合成cDNA。1.3.2引物序列PIK3CA（GenbankNO:NM006218）:上游引物5′CCCTGCTCATCAACTAGGAAACC3′,下游引物5′TTGCCGTAAATCATC

7、CCCATT3′，共160bp。GAPDH(Genbank:NM002046):上游引物5′GAAGGTGAAGGTCGGAGTC3′,下游引物5′GAAGATGGTGATGGGATTTC3′,共226bp。引物由上海生工公司合成。1.3.3PCR反应以合成的cDNA作为反应模板,反应体系100μL，包括cDNA20μL，dNTP混合物（10mmol/L）1.8μL，MgCl2（25mmol/L）7.5μL，10×逆转录缓冲液9.8μL，上下游引物各50pmol，TaqDNA聚合酶2.5U，加无RNA酶水至终体积10