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1、基层兽医实验室开展禽流感血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验出现的误差分析与探讨南金鱼（酒泉市畜牧服务中心甘肃酒泉735000）酒泉市肃州区南环西路20号摘要：禽流感血凝（HA）和血凝抑制(HI)试验是禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。近年来，随着动物疫病防控形势的需要，禽流感疫病的日常监测、集中监测和免疫抗体检测工作量逐年增加，禽流感血凝（HA）和血凝抑制(HI)试验成为当前基层兽医实验室检测禽流感的唯一技术方法，其试验结果的准确性直接影响着重大动物疫病防控策略的制定。通过开展基层兽医实验室比对试验发现影响禽流感血凝（
2、HA）和血凝抑制(HI)试验的因素诸多，分析实验结果和关键操作步骤，总结试验误差，归纳出从试剂配制、器材准备和操作规范三方面改进完善试验。关键词：禽流感；血凝抑制；结果误差；分析与探讨禽流感血凝（HA）和血凝抑制(HI)试验是禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。近年来，随着动物疫病防控形势的需要，禽流感疫病的日常监测、集中监测和免疫抗体检测工作量逐年增加，禽流感血凝（HA）和血凝抑制(HI)试验成为当前基层兽医实验室检（监）测禽流感的唯一技术方法，其试验结果的准确性直接影响着重大动物疫病防控策略的制定。为探索试验操作技巧
3、、提高实验结果准确性，我们对同1组（9份）血清在7个县级兽医实验室（实验室名称在下文分别以A、B、C、D、E、F、G代替）开展了抗体检测比对试验，发现在不同的实验室、不同的人员操作下出现不同的结果。根据此次比对试验，笔者对影响基层兽医实验室开展禽流感血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验结果准确性的因素进行了简单分析讨论，以供同行参考。1.试验方法1.1检测样品：血清样品1组（共9份，已知抗体滴度），根据实验需要将每份血清分成等量的若干小份（每小份不少于0.5ml）共50份，并重新编号后，随机组合成7组血清盲样（每组10份血清，其中有
4、3-4份重复）（血清盲样分配见表一）。1.2诊断试剂：同一生产批号的（哈尔滨维科生物技术开发公司生产，批号分别为200901和200801）禽流感H5(HI)标准抗原和标准阳性血清各7份（诊断试剂分配见表一）。1.3材料准备：1.3.196孔900和1100V型微量反应板和不同型号微量移液器数把（配有滴头），各实验室自行准备。1.3.2阿氏（Alsevers）液、1%3鸡红细胞悬液和pH7.2的0.01mol/L磷酸盐缓冲液（PBS），各实验室均按照《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T18936—2003）中配制方法配置。1.4检
5、测步骤：按照《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T18936—2003）要求操作（具体步骤略）。样品分组编号情况(表一)样品编号分组后盲样编号ABCDEFG1751110121,510883263247894845975193668,10107179362158324671094,6,7,93,5,61,2,6,72,9,104,5,8,103,5,92,3,4,8标准抗原1份1份1份1份1份1份1份阳性血清1份1份1份1份1份1份1份合计12份12份12份12份12份12份12份禽流感(HI)检测结果分析（表二）样品编号标准滴度各
6、实验室检测结果检测次数与标准滴度相比ABCDEFG相同滴度出现低一滴度出现高一滴度出现出现其他结果次数比例次数比例次数比例次数比例128 2828272729276233%350%117%00%2262725272026202107114%114%229%343%327202827272105240%0%120%240%4210210210210282105480%0%0%120%526262920284125%0%0%375%625202520204125%0%0%375%7262026202520206117%117%0%46
7、7%8210272102820282106233%0%0%467%9202020202020202077100 0% 0% 0%合格率60%90%90%30%70%50%60%502142%510%48%2040%2.结果分析2.1数据分析：50份血清盲样中，各3实验室检测滴度与标准滴度完全一致的有21份，占检测数的42%；检测滴度比标准滴度低一个滴度的有5份，占检测数的10%；检测滴度比标准滴度高一个滴度的有4份，占检测数的8%；出现其他较大差距滴度的有20份，占检测数的40%；按照正常误差为±1个滴度的标准计算，此次比对试验检
8、测合格30份，占检测数的60%。试验结果用SPSS软件进行方差分析，表明差异显著（P>0.05）。2.2误差分析：2.2.14倍（HAU）抗原配制：此次试验中，血凝（HA）试验即4倍（HAU）抗原配制在7个实验室出现了4种配制比例。A和G实验室在第
