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1、浅谈钦州地区猪链球菌的分离鉴定与药敏试验的论文 摘要采集疑似链球菌病的猪病料进行细菌分离,根据培养特性、染色特点、形态观察、生化试验鉴定为1株猪链球菌;药敏试验表明,该分离菌株对氨苄西林、包孢他啶、万古霉素、头孢氨苄、克林霉素、恩诺沙星高度敏感,对多黏菌素、环丙沙星、卡那霉素中度敏感,对红霉素、青霉素低度敏感,而对土霉素、四环素、强力霉素、复方新诺明有明显耐药性。 关键词猪链球菌;分离鉴定;药敏试验;广西钦州 猪链球菌病是现代养猪业中的一种重要传染病,主要引发猪脑膜炎、关节炎、心内膜炎和败血症[1]。2型猪链球菌在
2、全球范围内都是优势流行株。2005年6—7月发生在四川省资阳、内江等地区的2型猪链球菌感染事件造成了极大的经济损失,引起社会广泛关注[2]。另外,1型和9型是除2型外的流行株[3-4],也可使猪发病。虽然理论上有很多药物能治疗猪链球菌病,但随着抗菌药物的广泛使用以及临床中不合理用药,使得病原菌的耐药现象日趋严重[5-6]。本研究对地区猪场送检的疑似链球菌病病死猪的淋巴结、肺、脾、扁桃体等病变组织进行了细菌的分离鉴定,对分离菌进行了药敏试验,以期为该病的临床防治提供科学依据。 1材料与方法 1.1试验材料 试验病料为采自广
3、西钦州地区某猪场疑似猪链球菌发病的仔猪淋巴结、肺、脾、扁桃体等病变组织。试验试剂为:绵羊血琼脂平板、绵羊血琼脂斜面、普通琼脂培养基、营养肉汤、巧克力培养基等,均按常规方法制备,4℃冰箱保存备用;药敏纸片购自北京天坛药物生物技术开发公司;细菌微量发酵管购自杭州天和微生物试剂有限公司。.cOm 1.2细菌分离 采用无菌法将采集的疑似链球菌病发病的仔猪淋巴结、肺、脾、扁桃体等病变组织,划线接种于含有8%绵羊血的琼脂平板、巧克力培养基和营养琼脂平板中,37℃培养24h,观察细菌生长特性。挑取绵羊血平板上针尖大小、表面光滑、灰白色、
4、圆形、半透明、边缘整齐的单个菌落进行革兰氏染色。革兰氏染色阳性、有链状排列或成对的球形细菌为可疑菌落,接种于葡萄糖肉浸液肉汤液体培养基内进行增菌培养,37℃纯培养24h后再次进行革兰氏染色,对镜检为革兰氏染色阳性、成对、短链球菌,再做接触酶试验,结果为阴性者,即确定为猪链球菌,接种于绵羊血琼脂斜面上,置于4℃冰箱中保存备用。 1.3生化试验 将分离菌株分别接种于木糖、麦芽糖、蔗糖、菊糖、肌醇、阿拉伯糖、葡萄糖、乳糖、棉子糖等微量生化反应管中,同时做mr试验和vp试验,37℃培养24h后,观察其生化反应特性。 1.4药敏试
5、验 采用纸片扩散法。将所保存的纯化菌株分别在37℃营养肉汤中培养24h,用无菌生理盐水将菌液稀释至浓度约为200万个/ml,用无菌棉拭子蘸取菌液,均匀涂布于营养琼脂平板,待稍干后,将各种抗生素药敏纸片平贴于培养基表面,并轻按纸片中心,使其附着严密,37℃培养24h后,观察、测定抑菌圈的直径。判定猪链球菌对药敏纸片的敏感性标准:抑菌环直径在15mm以上为高度敏感;10~15mm为中度敏感;10mm以下为低度敏感;无抑菌环为不敏感。 2结果与分析 2.1培养结果 分离菌在绵羊血琼脂平板上菌落直径为0.5~1.0mm、灰白色
6、、半透明、表面光滑、圆形、边缘整齐,呈α溶血;巧克力培养基上菌落特征与绵羊血平板菌落特征相似;革兰氏染色阳性、有链状排列或成对的球形细菌;在普通培养基中不能生长。 2.2生化试验结果 分离菌株接种于各个微量生化反应管,同时做mr试验和vp试验,结果见表1。 2.3药敏试验结果 对分离培养获得的纯培养物进行药敏试验,结果见表2。由表2可知,该分离菌株对氨苄西林、头孢他啶、万古霉素、头孢氨苄、克林霉素、恩诺沙星高度敏感,对多黏菌素、环丙沙星、卡那霉素中度敏感,对红霉素、青霉素低度敏感,(上接第338页) 而对土霉素、四环
7、素、强力霉素、复方新诺明有明显耐药性。 3结论与讨论 从采集的疑似链球菌病的猪病料中分离到1株细菌,根据培养特性、染色特点、形态观察、生化试验鉴定为猪链球菌。药敏试验结果表明,该分离菌株对氨苄西林、头孢他啶、万古霉素、头孢氨苄、克林霉素、恩诺沙星高度敏感,对多黏菌素、环丙沙星、卡那霉素中度敏感,对红霉素、青霉素低度敏感,而对土霉素、四环素、强力霉素、复方新诺明有明显耐药性。该菌株存在多重耐药性。 由于各地用药习惯以及近年来抗生素的滥用,产生了大量的耐药菌株,为疾病的后续治疗产生了很大的影响,也使得疾病更加难以控制。因此,
8、建议临床用药前,有条件的先进行菌株的药敏试验,根据试验结果进行指导用药,并注意穿梭用药,避免耐药菌株的出现。 4
