光合细菌生产车间关键点控制技术规范

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1、光合细菌（PSB）生产车间关键点控制技术规范通威基因实验室　顾继锐一、控制要求光合细菌（PSB）生产中最为关键的技术问题就是创造有利于PSB生长的良好环境及减少杂菌（大肠杆菌、霉菌等）的污染。PSB生长所必需的要求为：培养基、光照、厌氧（或微厌氧）、温度（适应范围15～40℃，28～36℃最佳）、pH值6.0～8.5。二、生产环节控制点1．菌种保存：每1～2个月做一次菌种保存，按无菌操作要求操作，所用器械及药品要灭菌，保种操作时在无菌操作台内进行，避免染菌。2．液体一级种子培养：用曝气自来水配培养基，高温灭

2、菌20分钟（NaHCO3、NH4Cl用细菌滤器过滤除菌），加PSB种子时在无菌操作台内进行，接种量为15%（余下全部相同），接种完成后放于有光照的环境中培养，培养瓶每天上下混匀2～3次；浓度达30亿/ml时可以进行下一步的操作。3．二级种子培养：曝气用来水配制PSB培养基，盛水容器定期消毒；培养用塑料袋洁净无污染；光照充足；每天翻动混匀。4．大规模生产：①利用太阳能培养（生产淡季建议用此法可降低生产成本）：夏季气温过高，若用太阳作为光照能源，则应采取部分遮阳（用黑色的遮阳塑料网），通风的降温措施，以防光合细

3、菌快速老化死亡；冬天则气温低，则要采取对暖棚增温的方法，使培养液在暖棚内晒太阳；春秋季则可直接放在太阳底下。总之要使之温度在25～36℃之间，过些日子它自然会长成深红色的成品。②利用白炽灯作为光能生产（生产旺季可用此法加快生产速度）：塑料袋内培养液的深度不要大于30公分，白炽灯与液面距离不要大于20公分，否则不利于光照透过，降低了白炽灯的使用效率。 ③包装瓶内培养（短期内供不应求时可用此法）：把培养基配好后按比例加入PSB种子，混匀，直接分装，放于光照好、温度适宜的房间内堆放培养，每天上下摇动，待菌液浓度达

4、标后即可上市销售。此法不但操作简单减少了操作环节和劳动强度，而且还可减少产品染菌的机会，降低杂菌数。以上几种生产方法中应注意的事项：A．所用的器械要做到使用完就消毒，可采取用含氯消毒剂（消完毒后要在阳光下暴晒去除氯再使用）或10%的食盐溶液进行浸泡消毒（建议用此法）。B．温度控制在28～38℃之间，过低PSB生长速度缓慢，需采取加热措施：过高则会加速光合细菌的老化，降低PSB的货架期，需采取通风降温措施。C．光照强度，以3000～4000勒克斯（LX）为最佳，即每25公斤菌液需要用相当于60瓦左右的白炽灯作

5、光源，而太阳光照为最好且不要成本。D．水源及培养基原料要统一，才能保证每一批次的产品在色泽及含菌量上保持一致。E．保存光合细菌，温度是关键。刚培养好的成品应尽量降温，逐步降低光照，以降低“生长惯性”，没有生产惯性时，光合细菌就进入了稳定期，此时在阴凉避光处可保存6个月。光合细菌液体不能用金属容器贮存。将高浓度光合细菌菌液用沸石粉吸附后(光合细菌：沸石粉=1:3～4)，阴干或风干粉碎即得粉状固体光合细菌产品。三、目前生产车间需改进的措施1．澄水桶上需加盖，防止室外空气中的灰尘及杂菌进入，减少水源染菌机会。2．

6、车间上方加遮阳网，夏季给车间降温。3．用桶分装时，桶内的PSB菌液要不断搅动，使同批次的产品含菌量保持一致，减少因含菌量不同造成的色泽不一的现象出现。4．光合细菌库房要选择有光，凉爽的房间存放，以延长PSB保持期（此保存要点需要向经销商交待清楚）。四、附录1．菌种保存方法：　　为保证菌中的纯度及鲜度需对生产用的光合细菌菌种进行转植保存，保存时用生产用液体培养基（加VC0.5g/L）厌氧培养，培养基必须灭菌，待培养的菌液浓度达到108级后可停止培养，先把产物放于有光处保存，然后逐渐向弱光及无光处转移，3天后便

7、可放于4℃冰箱内保存2～3个月，3个月后重复以上步骤进行转种保存。2．产品中细菌总数的测定培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂7g，加入到1L蒸馏水中，加热、搅拌使之溶解，pH值调节为7.0～7.2。器皿：无菌三角瓶，无菌的带玻璃塞瓶，无菌培养皿，无菌移液管，无菌试管等。实验方法：用无菌容器取样，并速送回实验室检测。用无菌移液管吸取1ml样，加入无菌培养皿中（每个水样重复3个培养皿），然后在每个上述培养皿内各加入约15ml已融化并冷却至45～50℃的牛肉膏蛋白胨琼脂培养

8、基，并轻轻旋转摇动，使水样与培养基充分混匀，冷凝后即成检测平板。然后将其倒置于37℃恒温箱内培养24h。将培养24h的平板取出，用肉眼观察，计平板上的细菌菌落数（计数时，对那些看来相似、距离很近但不相触的菌落，应一一计数）。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2009-5-15