慢性粒细胞白血病细胞eif4e mrna表达及影响因素论文

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1、慢性粒细胞白血病细胞eIF4EmRNA表达及影响因素论文黄莲芬罗红伟肖青彭辉冯文莉【摘要】目的：初步探索真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)在慢性粒细胞白血病（CML）不同病程，包括慢性期（CP）、加速期(AP)、急变期(BC)、急变治疗后(BCR)骨髓细胞中mRNA表达及其在K562细胞中的表达影响因素.方法：RTPCR检测25例骨髓样本［CML急变期（CMLBC）10例，慢性期(CMLCP)8例，加速期（CMLAP）1例，急变期治疗后（CMLBCR）3例，贫血对照3例］eIF4EmRNA表达，及其中9例CMLeIF4E和RNA结合蛋白

2、K（hnRNPK）mRNA表达，并分析两种基因表达相关性.用酪氨酸激酶抑制剂STI571处理K562细胞.freelRNA表达变化.结果：与贫血对照组相比，CMLBC和CMLBCReIF4EmRNA表达差异有统计学意义（P0.05），而与CMLCP无统计学意义，hnRNPK与eIF4EmRNA表达呈线性相关（r=0.79,P0.01）.STI571能轻微下调K562细胞eIF4EmRNA表达.hnRNPK干扰组hnRNPK和eIF4EmRNA表达比空载对照组分别下降55.22％，55.27%.结论：CML急变期eIF4EmRNA表达显著增高，BC

3、R/ABL融合蛋白可能参与调节eIF4EmRNA表达但效应有限，hnRNPK分子在eIF4EmRNA表达调控中可能发挥一定作用.【关键词】白血病，髓样，慢性；真核细胞起始因子4E；STI571；核糖核蛋白K，核不均一0引言慢性粒细胞白血病（ChronicMyelogenousLeukemia，CML）是源于造血干细胞异常的恶性克隆性增殖性疾病，具有特征性的ph染色体和bcr/abl融合基因，所编码的BCR/ABL融合蛋白具有异常的酪氨酸激酶活性，是CML发生和发展的主要因素，在CML从慢性期(CMLCP)向急变期(CMLBC)转化过程中起关键作用，然

4、而急变的具体机制仍不清楚.研究报道，真核细胞翻译起始因子4E(Eukaryotictranslationinitiationfactor4E，eIF4E)在很多的人类肿瘤中过表达，可促进肿瘤增殖［1］，抑制凋亡［2］，阻滞分化［1,3-4］.研究［5］发现，mRNA帽结合复合物（eIF4F）是CML急变时一个重要治疗靶标，而eIF4E是该复合物重要的组成部分.已知RNA结合蛋白K(heterogeneousnuclearribonucleoproteinK，hnRNPK)在CML急变细胞中高表达［6］，而hnRNPK蛋白在Hela细胞中通过转录水平升高

5、eIF4E表达而诱导恶性表型发生［7］.我们选择eIF4E为切入点，采用RTPCR技术在CML细胞中检测eIF4EmRNA表达，并进一步探讨其与BCR/ABL融合蛋白及其下游分子hnRNPK之间的关系，旨在为CML急变提供新的分子治疗靶点.1材料和方法1.1材料采集2006/2007年间重庆医科大学附属第一、二医院血液科诊断为CML的患者骨髓标本22例，其中,CMLCP8例，加速期(CMLAP)1例，CMLBC10例，急变治疗后有所缓解(CMLBCR)3例，以及贫血对照骨髓3例.MMLV逆转录试剂盒，限制性内切酶EcorⅠ，HindⅢ，DN

6、AMarker等（TaKaRa公司）；质粒抽提试剂盒（Qiagen公司）；TransfastTM转染试剂（Promega公司）；G418（Invitrogen公司）；酪氨酸激酶抑制剂STI571获赠于诺华制药公司.DH5α菌株和K562细胞株和PT67细胞由本室储存.pSUPERretrohnRNPKshRNA(含有5′tggtgaatttggtaaacgc3′)和pSUPERretroneo+gfp逆转录病毒载体获赠于DaniloPerrotti教授［6］.根据人eIF4EmRNA序列(NM_001968)以及hnRNPKmRNA序列（NM_002

7、140，NM_031262，NM_031263），利用PrimerPremier5.0软件自行设计PCR引物，由上海生物工程技术有限公司合成.eIF4E引物,P1：5′ACGGAATCTAATCAGGAGGT3′，P2：5′TTCCCACATAGGCTCAATAC3′，产物长度：246bp.hnRNPK引物，P1：5′CCCGATAGGGTTGTAGAGTG3′，P2：5′ATTGCAGAGTCCCAAGTTTC3′，产物长度：452bp.βactin引物，P1：5′GTGGACATCCGCAAAGAC3′，P2：5′AAAGGG

8、TGTAACGCAACTAA3′，产物长度：302bp.1.2方法1.2.1骨