酵母工程菌表达的几丁质酶分离及酶学性质研究

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1、青岛农业大学毕业论文（设计）题目：酵母工程菌表达的几丁质酶分离纯化及酶学性质研究姓名：XXX学院：生命科学学院专业：XXX班级：XXXX学号：XXX指导教师：XXX2011年6月15日毕业论文（设计）诚信声明本人声明：所呈交的毕业论文（设计）是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，论文中引用他人的文献、数据、图表、资料均已作明确标注，论文中的结论和成果为本人独立完成，真实可靠，不包含他人成果及已获得青岛农业大学或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作

2、了明确的说明并表示了谢意。论文（设计）作者签名：日期：年月日毕业论文（设计）版权使用授权书本毕业论文（设计）作者同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文（设计）的复印件和电子版，允许论文（设计）被查阅和借阅。本人授权青岛农业大学可以将本毕业论文（设计）全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本毕业论文（设计）。本人离校后发表或使用该毕业论文（设计）或与该论文（设计）直接相关的学术论文或成果时，单位署名为青岛农业大学。论文（设计）作者签名：日期：年月日指导教师签名：日

3、期：年月日目录摘要1Abstract.2引言31材料与方法41.1实验材料41.1.1供试菌株41.1.2试剂41.1.3培养基及有关溶液的配制51.1.4主要仪器设备71.2实验方法71.2.1酵母工程菌的培养和几丁质酶的诱导分泌表达71.2.2N-乙酰氨基葡萄糖（NAG）标准曲线的建立71.2.3酵母工程菌产酶曲线的测定81.2.4几丁质酶的分离纯化81.2.5几丁质酶的SDS-PAGE检测81.2.6几丁质酶的酶学性质92结果与分析102.1N-乙酰氨基葡萄糖标准曲线102.2酵母工程菌产酶曲线的测定1

4、12.3几丁质酶的SDS-PAGE检测112.4几丁质酶反应的最适温度122.5几丁质酶反应的最适pH值132.6几丁质酶的热稳定性132.7几丁质酶的pH稳定性132.8不同金属离子对酶活性的影响142.9变性剂、蛋白抑制剂和有机溶剂对几丁质酶活性的影响142.10几丁质酶底物特异性测定153结论与讨论153.1结论153.2讨论163.3展望17致谢17参考文献18酵母工程菌表达的几丁质酶分离纯化及酶学性质研究生物科学专业XXXX指导教师XXX摘要：本文转几丁质酶基因的酵母工程菌株GS-tachit1-K

5、进行诱导分泌表达，分离纯化发酵液中的几丁质酶，测定它的酶学性质。结果表明该酶的最适反应温度为50℃，在35℃以下相对稳定，最适反应pH值为5.5，在pH4.5-6.5之间稳定。Cu2+、Ag+、Hg2+和SDS对酶活性有明显的抑制作用，该酶能特异性降解胶体几丁质。本研究结果为该酶的研究和开发利用提供了科学依据。关键词：酵母工程菌；表达；几丁质酶；酶学性质19PurificationandCharacterizationofChitinaseSecretedbyYeastEngineeringStrainStu

6、dentmajoringinbioscienceXXXXTutorXXXXXXAbstract:Inthiswork,theyeastengineeringstrainGS-tachit1-Ktransformedwithchitinasegenewasinducedtoexpress,purifytheChitinaseoffermentation,todetermineitsenzymologycharacterization.Itisprovedthattheoptimaltemperaturefort

7、hechitinasewas50℃andthechitinaseactivitywasrelativelystablewhenthetemperaturewasunder35℃.TheoptimalpHvaluewas5.5andthechitinaseactivitywasstablewhenthepHvaluewasbetween4.5and6.5.TheenzymaticactivitywasinhibitedevidentlybyCu2+,Ag+,Hg2+andSDS.Theproteinhadasp

8、ecificactivitytodegradecolloidalchitin.Thisworksuppliesscienceevidencefortheresearchanddevelopmentofthechitinase.Keywords:YeastEngineeringStrains;Express;Chitinase;EnzymaticCharacterization19引言几丁质（chit