广藿香愈伤组织诱导和分化再生植株的研究论文

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1、广藿香愈伤组织诱导和分化再生植株的研究论文林小桦，贺红，吴立蓉，张燕玲，刘星【摘要】【目的】开展广藿香愈伤组织的诱导及分化再生植株的研究，建立高效的组织培养再生系统。【方法】以广藿香叶片、带节茎、不带节茎及根尖为材料进行离体培养，筛选影响愈伤组织诱导、增殖及分化的因素。【结果】6苄氨基嘌呤(BA)或N苯基N123噻二唑5脲(TDZ)与α萘乙酸(NAA)配合有利于愈伤组织的诱导，BA的适宜浓度为02～05mg/L；4种外植体中.freeloncablin(Blanco)Benth.arestudie

2、dtoestablishahighefficiencyregenerationsystemfortissueculture.MethodsTheleafsegments,nodularstemsegments,stemsegmentsandroottipsfromPogostemoncablin(Blanco)Benth.ultiplicationanddifferentiationofcallusinopurine(BA)orthidiazuron(TDZ)binedalconcentrationsofBAg/L.No

3、dularstemsegmentsandstemsegmentsostsuitableexplantsforcallusinduction.ThemediumcontainingBAandNAApromotedthemultiplicationofcallus.Themultiplicationrateanddifferentiationrateof30daycallusuchhigherthanthoseof60daycallus.BAleafsegmentsexertedahigherdifferentiation

4、rate.ConclusionAhighefficiencyregenerationsystemofcallusinductionandplantregenerationfromPogostemoncablin(Blanco)Benth.hasbeenestablished.Keyent;INVITROCULTURE;CALLUS广藿香［Pogostemoncablin(Blanco)Benth.］为唇形科刺蕊草属植物，以干燥地上部分入药，其性辛、微温。具有芳香化湿，开胃止呕，发表解暑的功效［1］。广藿香为广东道地药材

5、，“十大广药”之一，是多种著名中成药“藿香正气丸”、“藿胆丸”等以及现代中药制剂“抗病毒口服液”的主要原料。广藿香原产于菲律宾、马来西亚等国，最早自宋代引入我国，栽培历史悠久。广藿香生产中面临青枯病的危害，该病由青枯菌（RalstoniaSolanacearum）侵染所致，为典型的维管束病害［2~3］。在我国产区栽培的广藿香，罕见开花结实［4］，长期以来，生产上采用扦插繁殖，病原体通过无性繁殖传递，且逐代积累，危害越来越严重，迫切需要进行抗病品种的选育。近年来，基因转移及人工诱变等改良药用植物农艺性状的技术，为广藿香抗病育

6、种提供了可能，而要开展相关的研究，首先要建立高效的组织培养再生系统。本文以广藿香多种外植体为材料，筛选影响广藿香愈伤组织诱导、增殖及分化的多种因素，以期建立高效的愈伤组织诱导及分化再生植株的离体再生系统，为遗传转化及人工诱变育种奠定基础，现报道如下。1材料和方法11材料试验材料采自广州中医药大学药圃，选择生长健壮、无病虫害的广藿香单株，取其顶芽、带节茎及叶片；经蒸馏水冲洗干净后，用体积分数为70%乙醇浸泡30s，转入1g/L的HgCl2溶液浸泡消毒10min，再用无菌水漂洗5～8次，把残留HgCl2漂洗干净，接种于Mur

7、ashgeandTucker（MT）+02mg/L6苄氨基嘌呤(BA)培养基上，诱导丛芽的生成，待丛芽长出后将其移至MT培养基中培养，试管苗长至5～7cm时即可作材料使用。12方法121外植体培养取广藿香试管苗的叶片、带节茎、不带节茎及根尖为外植体进行培养。外植体在培养基中的放置方式为：叶片及根尖平放，带节茎及不带节茎为形态学下端下插。每种处理接种外植体数为30块左右，设置3次重复。122愈伤组织的诱导增殖以广藿香叶片及带节茎等诱导愈伤组织，选取未分化出芽的愈伤组织接种至增殖培养基中。每种处理一般接种30块愈

8、伤组织，设置3次重复。诱导及增殖培养基即以MT培养基为基础，根据试验要求添加不同浓度的6苄氨基嘌呤(BA)、α萘乙酸(NAA)、N苯基N'123噻二唑5脲(TDZ)及二氯苯氧乙酸(24D)等植物激素组成。123愈伤组织的分化以实验中诱导的愈伤组织为材料，接种至分化培养基中培养