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1、AmincoBowmanSeries2型荧光分光光度计使用,荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等很多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定,不但可以做一般的定量分析,而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化,从而阐明分子结构与功能之间的关系。荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是190~650nm，发射波长扫描范围是200~800nm。可用于液体、固体样品（如凝胶条）的光谱扫描。荧光光谱法具有灵敏度高、选择性强、用样量少、方法简便、工
2、作曲线线形范围宽等优点，可以广泛应用于生命科学、医学、药学和药理学、有机和无机化学等领域。一．基本结构与原理由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。基本结构和原理如图所示，光源与检测器成直角方式安排。 1.光源：为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm范围内强度几乎相等，故较常用。2．激发单色器：置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的激发光谱。3．发射单色器：置于样品室和检测器
3、之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色器。筛选出特定的发射光谱。4．样品室：通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。丈量液体时，光源与检测器成直角安排；丈量固体时，光源与检测器成锐角安排。5．检测器：一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号。 二．AMINCO-Bowman扫描荧光分光光度计AmincoBowmanSeries2型荧光分光光度计是美国Thermo司产品，是目前最新的扫描荧光分光光度计，具有独特的双光源设计。 (一)结构特点1．氙灯、闪光灯150W连续照明灯的光照强度足以进行灵敏度很高的荧
4、光丈量；闪光灯既可用于荧光丈量，又可用于磷光丈量。可根据自己的分析要求选择一种或两种光源。2.单色器均为Seya-Namioka设计，采用凹面全息光栅和为数极少的反射镜。既简单又耐用，不需要现场校准。计算机驱动光栅，控制狭缝，既正确(+/-0.1nm)、又快(12000nm/min)，可靠性还高。3．光电倍增管检测器光电倍增管（PMT）有两种工作模式：a.模拟――高灵敏度，宽动态范围，操纵方便；b.光子计数――提供极高的灵敏度,联结式盖锁可保护PMT。4．附件T-Optics多功能样品室可配多种附件，完成多种应用。(二)功能特点1．荧光发射光谱选择某一固定波长的光激
5、发样品，记录样品中产生的荧光发射强度与发射波长间的函数关系，即得荧光发射光谱。2．荧光激发光谱选定某一荧光发射波长记录荧光发射强度作为激发光波长的函数，即得荧光激发光谱。3．时间分辨技术；可用于对混合物中光谱重叠但有寿命差异的组分进行分辨并分别丈量。时间分辨荧光测定公式如下：P(t)=P0EXP(-t/τ)式中P(t)：拟合指数函数P0：强度取值EXP：指数运算符t：时间取值τ：荧光均匀时间寿命时间荧光光谱如图所示。其中A组分受激发而产生的荧光寿命短于B组分，因此可以对混合物中的A组分和B组分同时进行分辨和丈量。时间荧光光谱 4．偏振和各向异性技术；荧光偏振和
6、各向异性的丈量揭示了荧光体吸收光子和随后发射光子的均匀角移。偏振度与荧光体转动速度成反比，可用于测定抗体和抗原的含量。5．同步扫描技术；同步荧光技术是在同时扫描激发和发射波长的情况下来测绘荧光光谱图。由测得的荧光强度信号对发射或激发波长作图,即为同步荧光光谱。它包括固定波长的同步荧光和固定能量的同步荧光两种光谱。(1)固定波长的同步荧光光谱在同步扫描中,使激发波长和发射波长保持固定的波长间距,即在Δλ=λem-λex=常数的情况下进行扫描,以同步荧光信号(相对强度)对发射或激发波长测绘荧光光谱图,则为固定波长的同步荧光光谱。在同步扫描的荧光测定中,同步荧光信号强度I
7、s是激发波长的函数,其基本公式为:Is(λex,λem)=KcbEx(λex)EM(λem)式中,c为待测物质的质量浓度,b为试样溶液的厚度,K为实验条件下某常数,Ex为激发光谱的强度分布,EM为发射光谱的强度分布。由(1)式可知,在实验条件保持固定的情况下,测试物质的同步荧光信号强度与待测物质的质量浓度成正比。这是定量分析的依据。在利用同步荧光测试样品前,$K值必须慎重选择,只有当Δλ恰好为某吸收带和其发射带之间的波长间距时,才能观察到同步信号。(2)固定能量的同步荧光光谱固定能量的同步荧光光谱是指在同步扫描过程中,使激发波长与发射波长之间保持着固定的能量差,
