糖基化终产物对人肾小球系膜细胞半乳糖凝集素3基因表达的影响论文

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1、糖基化终产物对人肾小球系膜细胞半乳糖凝集素3基因表达的影响论文马婵娟，孙子林，金晖，杨涛，杨益宁［摘要］目的：研究糖基化终产物（AGEs）对人肾小球系膜细胞半乳糖凝集素3(galectin3)表达的影响。方法：将培养的人肾小球系膜细胞(HRMC)用不同浓度(50、100、200及400mgL-1)的AGEs干预24h或同一浓度(200mgL-1)的AGEs干预0、24、48及72h，以无血清培养基(DMEM)和相应浓度的牛血清白蛋白（BSA）为对照。用RTPCR检测细胞中半乳糖凝集素3的mRNA水平。结果：不同浓度AGEs组HRMC的半乳糖凝集素3mRNA水平与对

2、照组相比均有显著差异（P＜0.01），且随着AGEs浓度的增高，半乳糖凝集素3mRNA水平也逐渐增高(P＜0.05)；AGEs干预HRMC24、48、72h.freelRNA水平与对照组相比有显著差异（P＜0.05），且随着干预时间的延长，半乳糖凝集素3mRNA水平也逐渐增高(P＜0.01)。结论：AGEs以时间及剂量依赖的方式促进HRMC半乳糖凝集素3mRNA的表达。［关键词］糖基化终产物；人肾小球系膜细胞；糖尿病肾病；半乳糖凝集素3；基因表达Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofadvancedglycationendprod

3、ucts(AGEs)ontheexpressionofgalectin3inculturedhumanrenalmesangialcells(HRMC).MethodsTheAGEsBSAalbumin(BSA)econcentrationofBSAandAGEsBSA(50,100,200,400mgL-1)for24hor200mgL-1AGEsBSAfor0,24,48or72hrespectively.ThemRNAexpressionofgalectin3inHRMCRNAincellsincubatedgL-1AGEsBSArespectivelyfo

4、r24h（P＜0.01）orgL-1AGEsBSAfor0,24,48or72hrespectively（P＜0.05）increasedsignificantly.Moreover,e（P＜0.01）,thelevelofgalectin3mRNAincreased.ConclusionTheAGEsBSAcanstimulatetheexpressionofgalectin3inculturedHRMCinaconcentrationandtimedependentmanner.Keyanrenalmesangialcells;diabeticnephropa

5、thy;galectin3;geneexpression糖尿病肾病(diabeticnephropathy,.freelanrenalmesangialcell，HRMC）进行干预，观察HRMC半乳糖凝集素3基因表达的改变。1材料和方法1.1材料牛血清白蛋白(bovineserumalbumin，BSA，AMRESCO产品)；D葡萄糖(分析纯，重庆北培化学试剂厂产品)；HRMC株为TSV40及Hras原癌基因转染的永生系，保持了正常HRMC基本的形态学和生物学特性，由阮雄中博士（RenalUnit，RoyalFreeHospital，LONDON，UK）惠赠；无血

6、清培养基（DMEM）、HEPES为GIBCO公司产品；小牛血清为杭州四季青生物工程材料有限公司产品；TRIZOL、RTPCR试剂盒（RevertAidTMFirstStrandcDNASynthesis）、DNAMarkerSM0241（80、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1031bp）、Taq酶均购自Fermentas公司；半乳糖凝集素3及βactin引物由上海申能博彩生物工程公司合成；琼脂糖（电泳级）购自MDBio公司。1.2方法1.2.1AGEsBSA的制备按照第一作者所在实验室常规［4］，将葡萄糖用0.02molL

7、-1PBS溶液(pH7.4)配成0.5molL-1溶液,加入BSA(浓度为5.0gL-1)，过滤除菌，37℃孵育3个月，用PBS溶液透析除去未结合的葡萄糖。对照组BSA除不加葡萄糖外，同上条件制备。荧光光谱扫描(激发波长370nm、发射波长440nm、狭缝3nm)鉴定AGEsBSA。1.2.2HRMC的培养加入DMEM培养液(含10mmolL-1Hepes、0.37%NaHCO3、100UL-1青霉素、100UL-1链霉素及10%灭活小牛血清)，置于37℃、5%CO2的饱和湿度培养箱中，每天换液1次，3～4d传代1次。1.2.3分组实验当细胞达到一定数量后将处于对

8、数生长期的