骨髓基质细胞联合细胞因子对脐血cd133+细胞体外扩增作用的研究论文

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1、骨髓基质细胞联合细胞因子对脐血CD133+细胞体外扩增作用的研究论文毛平曾进龙王彩霞杜庆华【摘要】为了探讨胚胎骨髓基质细胞（FBMSC）联合细胞因子对脐血单个核细胞（MNC）中CD133+细胞的体外扩增作用，将新鲜脐血（CB）中分离出来的MNC接种于无血清培养体系中培养14天。实验分为4组：C组为空白对照组，不含基质细胞和细胞因子；S组为单用基质细胞组；F组为单用细胞因子组；SF组为联合使用基质细胞和细胞因子组。在第0，6，10及14天检测有核细胞总数、CD133+细胞数及集落形成单位（CFU）数。结果表明：各时间点SF组有核细胞总数的扩增倍数均高于其它组；除

2、了第14天外，SF组在第6、10天时CD133+细胞数、CFU数的扩增倍数均高于其它组。结论：胚胎骨髓基质细胞对延缓造血细胞的分化具有重要的作用，基质细胞联合细胞因子可以有效的扩增脐血单个核细胞及其中的CD133+细胞，这是一种比较接近于临床移植要求的造血细胞体外扩增方法。【关键词】骨髓基质细胞；造血干细胞；细胞扩增；CD133+细胞；脐血；细胞因子InVitroExpansionofCordBloodCD133+CellsSupportedbyBoneMarroalCellsandCytokinesAbstractTheaimofthisstudyanfet

3、albonemarroalcells(FBMSC)inbinationononuclearcells(MNC).MNCsseparatedfromcordblood(CB)freesystem.Onday0,6,10and14,totalnucleatedcells(TNC)atopoieticprogenitorcellsisolidcultureassay.TheresultsshoberofTNCarkablyincreasedinFBMSCandcytokinegroup,theexpansionofCD133+cellsandCFUportantr

4、oleindelayingthedifferentiationofhematopoieticcells.FBMSCinbinationotetheeffectiveexpansionofCBMNCandCD133+cells,thisexpandingsystemmaymeettheneedsforclinicalapplicationofexpandedCD133+cells.Keyarroalcell;hematopoieticstemcell;cellexpansion;CD133+cell;cordblood;cytokineCD34是目前造血干细胞（

5、HSC）最常用的表面抗原标志。随着对HSC研究的深入.freell一次性塑料培养瓶购自美国BectonDickinson公司。DMEMLG培养液及胎牛血清（FBS）购自Gibco公司。青霉素和链霉素购自HyClone公司。无血清培养液使用StemspanTMSFEM，造血祖细胞半固体培养基使用MethocultTMGFH4434，圴购自加拿大StemCellTechnologies公司。干细胞因子（SCF）、酪氨酸激酶3类配基（FL）、血小板生成素（TPO）均购自英国PeproTech公司。CD133PE购自德国MiltenyiBiotech公司。流式细胞

6、仪为美国BectonDickinson公司FACSVantage产品。中国实验血液学杂志JExpHematol2007;15(2)骨髓基质细胞联合细胞因子对脐血CD133+细胞体外扩增作用的研究胚胎骨髓基质细胞滋养层的建立经家属知情同意后，取自然流产的胚胎（4-5月）3个。无菌条件下冲出骨髓液，经Ficoll离心后获得MNC，以1×106/cm2接种于5ml的DMEMLG培养液中（含有20%FBS，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素）。48小时后全量换液弃去悬浮细胞为原代细胞（F0），以后每隔5天进行半量换液。贴壁细胞融合达到80%时以0.05%胰

7、酶消化传代后为F1，F3至F5代的基质细胞,经15Gyγ射线照射,用于共培养，使用之前用PBS洗涤3次。脐血MNC的制备足月妊娠的健康产妇脐血，经病人及家属知情同意后取自本院，共10份，ACDA抗凝。所采脐血在4小时内按4∶1体积比与HES混匀之后静置30-45分钟沉淀红细胞，吸取上清经Ficoll密度梯度离心分离出单个核细胞（MNC），用PBS洗涤3次后备用。脐血MNC的液体培养体系及实验分组采用StemSpanTM无血清培养体系，SCF、FL、TPO的终浓度均为50ng/ml。实验分为4组：①C组：空白对照组，仅有培养基+MNC；②S组：基质细胞+MNC；

8、③F组SCF+FL+TPO+MNC;④