血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳

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1、血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳　　一、目的　　学习醋酸纤维薄膜电泳的操作，了解电泳技术的一般原理。　　二、原理　　醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。　　醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成，它具有均一的泡沫样的结构，厚度仅120μm，有强渗透性，对分子移动无阻力，作为区带电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少，应用范围广，分离清晰，没有吸附现象等优点。目前已广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白，糖蛋白和同工酶的分离及用在免疫电泳中。　　三、器材　　1．醋酸纤维薄膜（2×8cm）　　2．常压

2、电泳仪　　3．点样器（市售或自制）　　4．培养皿（染色及漂洗用）　　5．粗滤纸　　6．玻璃板　　7．竹镊　　8．白磁反应板　　四、试剂　　1．巴比妥缓冲液（pH8.6，离子强度0.07）1000mL　　巴比妥2.76g，巴比妥钠15.45g，加水至1000mL。　　2．染色液300mL　　含氨基黑10B0.25g，甲醇50mL，冰醋酸10mL，水40mL（可重复使用）。　　3．漂洗液2000mL　　含甲醇或乙醇45mL、冰醋酸5mL、水50mL。　　4．透明液300mL　　含无水乙醇7份，冰醋酸3份。　　五

3、、操作　　1．浸泡用镊子取醋酸纤维薄膜1张（识别出光泽面与无光泽面，并在角上用笔做上记号）放在缓冲液中浸泡20分钟。　　2．点样把膜条从缓冲液中取出，夹在两层粗滤纸内吸干多余的液体，然后平铺在玻璃板上（无光泽面朝上），将点样器先在放置在白磁反应板上的血清中沾一下，再在膜条一端2～3cm处轻轻地水平地落下并随即提起，这样即在膜条上点上了细条状的血清样品。　　3．电泳在电泳槽内加入缓冲液，使两个电极槽内的液面等高，将膜条平悬于电泳槽支架的滤纸桥上（先剪裁尺寸合适的滤纸条，取双层滤纸条附着在电泳槽的支架上，使它的

4、一端与支架的前沿对齐，而另一端浸入电极槽的缓冲液内。用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡，使滤纸紧贴在支架上，即为滤纸桥（它是联系醋酸纤维薄膜和两极缓冲液之间的“桥梁”）。膜条上点样的一端靠近负极。盖严电泳室。通电。调节电压至160V，电流强度0.4～0.7mA／cm（毫安／厘米）膜宽，电泳时间约为25分钟。　　4．染色电泳完毕后将膜条取下并放在染色液中浸泡10分钟。　　5．漂洗将膜条从染色液中取出后移置到漂洗液中漂洗数次至无蛋白区底色脱净为止，可得色带清晰的电泳图谱。　　定量测定时可将膜条用滤纸压平吸干，按区

5、带分段剪开，分别浸在体积0.4mol／L氢氧化钠溶液中半小时，并剪取相同大小的无色带膜条作空白对照，在A650nm进行比色。或者将干燥的电泳图谱膜条放入透明液中浸泡2～3分钟后取出贴于洁净玻璃板上，干后即为透明的薄膜图谱，可用光密度计直接测定。思考题　　1．用醋酸纤维薄膜做电泳支持物有什么优点？　　2．电泳图谱清晰的关键是什么？如何正确操作？