植物生理学研究技术实验指导

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1、实验一、叶片培养---植物组织培养中的脱分化与再分化过程在组织培养中，一个成熟细胞或分化细胞转化为分生状态的过程，也就是愈伤组织形成的过程，称为脱分化(dedifferentiation)。植物的成熟细胞经历了脱分化之后，形成愈伤组织，由愈伤组织能再形成完整的植株，这一过程称为再分化(redifferentiation)。影响细胞分化和器官建成的内外因素(光照、温度、湿度、营养、激素等)很多，植物激素是最关键的因素，其中生长素和细胞分裂素的比例起决定作用。Skoog和Miller(1957)就提出了有关

2、植物激素控制器官形成的概念，指出在烟草髓组织培养中，根和茎的分化是生长素和细胞分裂素比率的函数，通过改变培养基中生长素和细胞分裂素的相对浓度可以控制器官的分化；IAA/CTK比值高时促进生根，低时促进茎、芽的分化，两者浓度相等时，组织倾向于以一种无结构的方式生长。对多数物种，激素调控器官发生都适用，但由于各种植物或不同的器官（及组织）中的内源激素的含量和动态变化不同，因此对于某一种具体的形态发生过程而言，它们所要求的外源激素水平也会有所不同。实验目的：通过此实验使学生初步掌握植物组织培养的基本方法，并了

3、解植物细胞的脱分化和再分化过程以及植物激素的调控作用。实验原理：根据“植物细胞全能性”的理论，植物细胞具有全套遗传信息，在适当条件下，可以通过脱分化和再分化途径进行器官发生，并进一步发育成完整再生小植株。在细胞分化和器官发生过程中，植物激素起着重要的调控作用，在植物激素不同的浓度配比下诱导外植体向不同的方向分化。实验材料：烟草叶片。仪器设备：高压灭菌锅，超净工作台，光照生长箱，pH汁、电炉，烧杯，搅棒，容量瓶，试剂瓶，量筒，移液管，白搪瓷杯，三角瓶，培养皿，酒精灯，手术刀，镊子，手术剪等。试剂:酒精,氢

4、氧化钠,6-苄基嘌呤(BA),萘乙酸（NAA）和MS培养基中无机盐和有机物。实验步骤:1.配制培养基按MS培养基配方(见附录)，配制各母液。(1)按下表，配制lO倍大量元素母液。lO倍大量元素母液:大量元素NH4NO3KNO3CaCl2·2H2OMgSO4·7H2OKH2PO4重量(g)16.519.04.43.71.7用蒸馏水溶解定容至1000毫升(CaCl22H2O需单独溶解，稀释后再与其它大量元素溶液混合)（2）按下表，配制100倍的微量元素母液。100倍的微量元素母液:微量元素KIH3BO3Mn

5、SO4·4H2OZnSO4·7H2ONaMoO4·2H2OCuSO4·5H2OCoCl2·6H2O重量（mg）836202230860252.52.5用蒸馏水溶解，定容至1000ml(MnSO4·4H2O需先用少量1NHCl溶解，然后再与其它微量元素溶液混溶)。（3）200倍铁盐母液的配制:称取Na2EDTA：3.37g；FeSO4·7H2O：2.78g，用蒸馏水溶解并定容至500ml(溶解时可加热)。（4）有机附加物的配制：20mg/ml的肌醇溶液:：称取2g肌醇，用蒸馏水定容至100ml。0.5mg

6、/ml的烟酸溶液：称取50mg烟酸，用蒸馏水溶解后定容至100ml。1.0mg/ml的甘氨酸溶液：100mg的甘氨酸，用蒸馏水溶解后定容至100ml。。0.5mg/ml的盐酸吡哆醇（VB6）溶液:50mg盐酸吡哆素，用蒸馏水定容至100ml。0.1mg/ml盐酸硫胺素（VB1）溶液:10mg盐酸硫胺素，用蒸馏水定容至100ml。（5）植物激素的配制：10－3mol/L的萘乙酸（NAA）溶液：称取18.6mg萘乙酸，用少量9535％乙醇溶解后，用蒸馏水稀释并定容至100ml。10－3mol/L的6-苄基嘌

7、呤(BA)溶液:称取22.5mgBA，用少量lmol/L的HCl溶解后，用蒸馏水稀释并定容至100ml。2将各种元素母液混合,配制MS培养基,其中1L体积中含大量元素母液100ml微量元素母液10ml铁盐母液5ml肌醇母液5ml甘氨酸母液2ml烟酸母液1ml盐酸硫胺素（VB1）母液1ml盐酸吡哆醇（VB6）母液1ml蔗糖30g琼脂7g再按下列浓度分别加入萘乙酸和6-苄基嘌呤母液：培养基123NAA1×10－6mol/L1×10－6mol/L5×10－7mol/LBA1×10－6mol/L1×10－7mo

8、l/L1×10－6mol/L(注意:1号培养基需加入10－3mol/LNAA母液lml，10－3mol/LBA母液lml;2号培养基需加入10－3mol/LNAA母液lml，10－3mol/LBA母液0.1ml;3号培养基需加入10－3mol/LNAA母液0.5ml，10-3mol/LBA母液1ml)3煮沸培养基并分装将培养基定容到1000ml后，用lmol/LNaOH或lmol/LHCl调pH值至5.8，煮沸培养基，使琼脂、蔗糖溶解，然后