核酸的分离纯化及性质研究201603

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1、核酸的分离纯化及性质研究201603核酸的分离纯化及其性质研究摘要：提取植物组织DNA和动物肝脏的DNA，先要研磨动植物组织得到研磨液，然后通过离心获得沉淀,分离出脱氧核糖蛋白（DNP）。利用阴离子除垢剂（SDS），将蛋白质和DNA分离开来，再用氯仿-异戊醇使蛋白质变性，然后离心除去变性蛋白质，之后用乙醇将DNA沉淀出来，得到粗DNA。为了获得高纯度的DNA，采用适量的RNase处理提取液来降解DNA中残留的RNA，再利用乙醇来提取DNA，重复多次来获得较纯的DNA。再利用DNA紫外吸收特性测定DNA的纯度，发现提取出来的DNA纯度还有待

2、提高。利用二苯胺法测定DNA的含量，发现DNA含量偏低，DNA产率很低。最后采用琼脂糖凝胶电泳来分离DNA，测定DNA片段的分子质量，结果实验成功的在紫外线下观察出了标准DNA条带以及待测样品条带。Abstract:InordertoextractDNAfromplanttissuesandanimalliver,weneedbreakthecelltogainlappingliquidfirst,thenseparatetheDNPbycentrifuging.UsetheSDStobreakproteinandDNA.Phenol-c

3、hloroform-isoamylalcoholMixturecanmakeproteindenaturation,thenremovethedenaturatedproteinbycentrifuging.Then,taketheDNAdipintoethylalcohol,itcanseparatetheDNA.InordertoobtainhighpurityDNA,usetherightamountofRNasetodisassembleresidualRNA,recycledethanoltoextractDNAoverando

4、veragain.UsingultravioletabsorptioncharacteristicsdeterminethepurityofDNA.wefoundthatthepurityofDNAishigh.DiphenylamineisusedtocheckthecontentofDNA,thediscoveryofDNA’scontentislow.DNA’syieldisverylow.Finally,agarosegelelectrophoresisusedtoseparateDNAandcheckmolecularweigh

5、tofDNAfragments.Undertheuvlight,wefoundstandardDNAbandingandthebandingwhichbelongtopendingtextsamplesuccessfully.关键词：核酸分离纯化紫外吸收二苯胺琼脂糖凝胶电泳前言：核酸（nucleicacid）是遗传信息的携带者，是基因表达的物质基础。核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。核酸广泛存在于所有动植物细胞微生物体内，生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。无论是进行核酸结构，还是功能研究，首先需要对

6、核酸进行分离和纯化。目前,人们已发现,除了遗传学上的用途外,核酸制剂还可广泛应用于医学、食品工业上，核酸及其衍生物具有有效的抗癌作用。所以核酸的分离纯化，一直广受大家的关注，本次试验就是以植物和动物作为实验材料，来进行核酸的分理纯化及性质研究。实验原理1，植物组织中DNA的分离和纯化原理DNA存在于细胞核中，天然状态的DNA绝大多数是以脱氧核糖核蛋白的形式存在，从细胞中提取DNA时，一般先获得脱氧核糖核蛋白（DNP），在将蛋白质除去。阴离子去垢剂SDS可使DNA与蛋白质分离，再用含少量异戊醇的氯仿去蛋白质，最后用乙醇把DNA从抽提液中沉淀

7、出来。DNP与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。以NACL为例：RNP在0.14mol/LNACL中溶解度很大，而DNP在其中的溶解度仅为纯水中的1%；当NACL浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP的溶解度则随之增加；当NACL的浓度为1mol/L时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2倍，因此通常可用1mol/LNACL提取DNA。进一步制备高纯度的DNA,可用适量的RNase处理提取液，以降解DNA中掺杂的RNA.为了防止提取过程中DNA被细胞中释放出来的DNase降解

8、以及DNA变性，整个提取过程应该在低温度下进行，同时可在研磨缓冲液中加柠檬酸三钠和Na2-EDTA抑制DNase的活性。提取的DNA是否为纯净，双链，高分子化合物，一般要通过紫外吸收，化学测定