食品安全地方标准小麦粉中偶氮甲酰胺的测定—高效液相色谱法

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1、Q/JLS02-2005DBS13河北省地方标准DBS13/009—2017食品安全地方标准小麦粉中偶氮甲酰胺的测定——高效液相色谱法（征求意见稿）河北省卫生和计划生育委员会发布2017-××-××实施2017-××-××发布附件217DBS13/009—2017前  言本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规则起草。本标准由河北省卫生和计划生育委员会提出并归口。本标准起草单位:河北科技大学。本标准主要起草人：高文惠、韩俊华、李亚丽、赵玲钰、李天密、张凯杰。本标准的附录A为资料性附录。本标准系首次发布。7DB

2、S13/009—2017食品安全地方标准小麦粉中偶氮甲酰胺的测定—高效液相色谱法1　范围本标准规定了小麦粉中偶氮甲酰胺的高效液相色谱测定方法。本标准适用于小麦粉中偶氮甲酰胺含量的检测。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。GB/T5009.1食品卫生检验方法理化部分总则3　原理样品中的偶氮甲酰胺用丙酮进行提取，经浓缩、脱脂、过滤后，高效液相色谱法测定，外标法定量。4　试剂和材料除另有规定外，

3、试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682一级水要求。4.1　乙腈：色谱纯。4.2　丙酮：色谱纯。4.3　正己烷：色谱纯。4.4　磷酸。4.5　磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O）。4.6　辛烷磺酸钠。4.7　标准品：偶氮甲酰胺（C2H6N6O2，CAS号：123-77-3）纯度大于或等于99%。4.8　色谱柱1：C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5µm，或相当者。4.9　色谱柱2：氰基（CN）柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5µm，或相当者。4.10　10mmol/L辛烷磺酸钠-5mmol/L磷酸氢二钾溶液：称取1.08g辛烷

4、磺酸钠（4.6），0.57g磷酸氢二钾（4.5）加水溶解并定容至500mL，用磷酸（4.4）溶液调节pH至3.5。4.11　5mmol/L磷酸氢二钾溶液：称取0.57g磷酸氢二钾（4.5）加水溶解并定容至500mL。7DBS13/009—20174.12标准储备液：准确称取适量偶氮甲酰胺标准品（4.7），用5mmol/L磷酸氢二钾溶液（4.11）或水溶解并配制成含偶氮甲酰胺100mg/L的标准储备液，现用现配。注：使用色谱柱1用5mmol/L磷酸氢二钾溶液（4.11）溶解，使用色谱柱2用水溶解。以下标准工作液和样品液的定容溶剂与本条相同。4.13基质

5、标准工作液：准确移取一定体积的标准储备溶液（4.12），用空白样品处理液稀释成浓度适当的标准工作液，现用现配。4.14微孔滤膜：0.45µm，水系。1　仪器和设备1.1　高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。1.2　高速离心机。1.3　超声波振荡器。1.4　旋转蒸发仪。1.1　涡旋混合器。1.5　离心管。1.6　分析天平：感量分别为0.01g和0.1mg。2　分析步骤2.1　样品制备试验前应将获取的样品充分混匀，样品制备方法按GB/T5009.1执行。2.2　样品处理称取小麦粉样品2g（精确至0.01g）于50mL具塞离心管中，加入15m

6、L丙酮（4.2）超声振荡提取15min，在7000r/min下离心5min，将上清液转移至50mL浓缩瓶中，再用10mL丙酮重复提取一次，合并提取液于浓缩瓶中，于常温下减压浓缩至干。残渣用2mL5mmol/L磷酸氢二钾溶液（4.11）或水超声涡旋5min复溶。再加入3mL正己烷（4.3）脱脂，静置分层后，取下层溶液过0.45µm水系微孔滤膜（4.14），滤液供高效液相色谱仪分析。2.3　高效液相色谱参考条件色谱条件可以参照以下用于任何一种色谱柱的测定。6.2.1用于色谱柱1测定a)色谱柱：C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5µm，或相当者

7、；b)流动相：10mmol/L辛烷磺酸钠-5mmol/L磷酸氢二钾溶液（A）（4.10）-乙腈（B）：80+20，v+v；c)流速：0.5mL/min；7DBS13/009—2017d)检测波长：245nm；e)进样量：20µL；f)柱温：30℃。6.2.2用于色谱柱2测定a)色谱柱：CN柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5µm，或相当者；b)流动相：水（A）-乙腈（B）：80+20，v+v；c)流速：0.8mL/min；d)检测波长：245nm；e)进样量：20µL；f)柱温：30℃。1.1　空白试验除不加样品外，均按上述测定步骤进行。1.2

8、　测定在仪器最佳状态下测定基质标准工作液和样品溶液，保证所测样品中待测物的响应值均在线性范围内，如果超出标准