重组结核分枝杆菌mr 38 000蛋白的表达、纯化和鉴定

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1、精品文档重组结核分枝杆菌Mr38000蛋白的表达、纯化和鉴定摘要从H37Rv基因组中扩增Mr38000蛋白基因并高效表达和纯化。用PCR技术从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增Mr38000蛋白序列，将其与pGEMTEasy载体连接转化E.coliDH5α，构建重组克隆载体pGEMTEasy/Mr38000，测序正确后将目的基因片断克隆入pQE80L原核表达载体并转化E.coliDH5α，IPTG诱导目的蛋白表达。经Westernblot鉴定目的基因与(His)6融合表达，将已表达的蛋白质通过NiNTA亲和色谱柱进行纯化。PCR得到结核分枝杆菌Mr3800

2、0蛋白基因，测序结果与GeBank中报道的完全一致。SDSPAGE显示，在Mr为38.5×103处有相应的蛋白质表达条带，Wesernblot鉴定为(His)6融合表达蛋白。经NiNTA亲和色谱柱进行纯化后可得到纯化的蛋白。成功克隆了铁调节蛋白基因Mr38000蛋白序列，并在E.coliDH5α高效表达，亲和层析后获得了纯化目的蛋白。关键词Mr38000蛋白;表达;纯化;结核分枝杆菌；Cloning,ExpressionandPurificationofMr38000proteinfromMycobacteriumtuberculosisZHANGMing

3、，LIJincheng，LINHang(Departmentofinternalneurology,2.emergency2016全新精品资料-全新公文范文-全程指导写作–独家原创9/9精品文档department,theFuZhougeneralhospital,FuZhou,350025,P.R.China)[Abstract]ToobtainMycobacteriumtuberculosisMr38000proteinfromH37RvDNA,expressefficientlyinE.coliandpurifytheMr38000proteins.

4、Mr38000proteingenewasamplifiedbyPCRfromthegenomeofH37RvandclonedintopGEMTEasyvector.Aftersequenced,Mr38000proteingenewasrecombinatedexpressionvectorpQE80Lbyrestrictionenzymedigestion,namedpQE80LMr38000.TheplasmidpQE80LMr38000wastransformedintoE.coliDH5αandinducedbyIPTG.Mr38000prot

5、einexpressionwasanalyzedbySDSPAGEandconfirmedbywesternblotwithmicespecificmAbagainst(His)6.Mr38000proteingenewasidenticalwithGeBankreported.ThepQE80LMr38000vectorexpressedproteinwithrelativemoleculeweightabout38.5kD,whichcouldbecaughtby(His)6mAb.Theexpressedproteincouldbepurifiedb

6、yNiNTAsystemkitwithdenativecondition.Mr38000proteingenehadbeensuccessfullyclonedandefficientlyexpressedinE.coli,TheresultsestablishedthebasisforfurtherstudyofthefunctionofMr38000protein.2016全新精品资料-全新公文范文-全程指导写作–独家原创9/9精品文档[Keywords]Mr38000protein;expression;purification;Mycobacter

7、iumtuberculosis(MTB)结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis,MTB）是结核病(tuberculosis,TB)的病原体。其在患者体内主要为细胞内生长。诊断方法的欠缺是结核病流行的重要原因。目前常用的PPD试验，常使BCG疫苗接种者被误检为阳性[1]，且对后期结核患者敏感性较低，存在明显不足。近年来，有研究发现Mr38000蛋白具有强的免疫原性，而成为结核分枝杆菌抗原的研究热点[2,3]，可能成为结核病血清学诊断试剂和疫苗研究的候选抗原之一。为此，我们在原核表达载体中表达结核分枝杆菌Mr38000蛋白并对其进行了

8、纯化，为进一步研究其抗原性和主要功能提供方便。１　材料和方法1.1