动物细胞培养常用技术

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1、动物细胞培养常用技术动物细胞培养常用技术.txt和英俊的男人握握手，和深刻的男人谈谈心，和成功的男人多交流，和普通的男人过日子。动物细胞培养常用技术动物细胞培养中山大学实验动物中心前言1885年Roux最早尝试使组织离体培养，材料是鸡胚神经板，采用生理盐水为培养液，并首次采用组织培养这个术语。1907年Harrison和1912年Carrel开始把组织培养作为一种方法，用于研究离体动物细胞的培养。由于组织培养在医学研究中的应用，如抗病毒疫苗的生产等，现已经逐渐发展成为一门精细技术。许多细胞株、细胞

2、系的培育成功，尤其是以人的肿瘤组织为材料建立的各种细胞系，如Hela细胞系（Gey，1952），可用来进行一系列研究，更加促进了组织培养技术的发展。组织培养中热门的研究领域1)细胞内部的活动，如DNA的复制和转录、蛋白质合成、能量代谢；2)细胞内部的流动，如RNA从细胞核向细胞质方向运转，激素受体复合物的易位等；3)生态学，如营养、感染、病毒或化学诱变、药物作用；4)细胞与细胞之间的相互作用，如胚胎诱导、细胞群体的动力学等。组织培养的分类及基本概念分类:1.组织培养(TissueCulture)指

3、的是从体内取出组织，在模拟体内生理环境，无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。2.细胞培养(CellCulture)培养物是单个细胞和细胞群。3.器官培养（OrganCulture）培养的是器官的原基、器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、生长和保持一定功能的方法。组织培养的细胞生物学特点:1.体内外细胞的差异：当人工条件和体内实际情况不完全相同时，细胞在体外培养后，一旦失去神经体液调节和细胞间相互影响，生活在缺乏动态平衡的环境中，发生变化则是必然。细胞最多见的

4、表现是：返祖（Atavism）现象，即失去原有组织结构和细胞形态、分化减弱或不显、细胞趋单一化、不死性、恶性状。2.细胞增殖和分化：是细胞生命进化中所获得的基本属性，增殖使细胞数量增多；分化使机体结构和功能多样化，最后演变成完整的有机体。培养细胞的分化细胞分化机制是极其复杂的，是在细胞与细胞、细胞与体液和细胞与细胞外基质相互作用下，众多基因参与、经过多阶段和多环节完成的动态演变过程。不适应（Deadaption）细胞在体内时所拥有的分化特性减弱或不显。例如肝细胞在体外丧失了产生酪氨酸转移酶的特性。

5、脱分化（去分化）（Dedifferentiation）由于基因变异而使细胞失去分化能力。如肝细胞失掉产生精氨酸酶及氨基酸转移酶的特性后，储存肝糖元的能力丧失，并很难再现。不适应和脱分化两个概念不同：不适应是因为生存条件改变而使分化发生抑制；从分子水平考虑，脱分化很可能是基因变异所致。培养细胞的形态1.贴附型：1）成纤维细胞：心肌细胞，血管内皮细胞等2）上皮型细胞：消化管外皮细胞，肝脏上皮细胞等3）游走型细胞：神经胶质细胞4）多形型细胞：神经组织细胞2.悬浮型：如癌细胞培养细胞的生长和增殖1.原代培

6、养（PrimaryCulture）阶段：或称初代培养。从体内取出组织接种培养到第一次传代，随不同的组织时间长短不一，一般为1~4w2.传代培养（Subculture）阶段：或称继代培养。也就是细胞系（Cellline）阶段，细胞增殖旺盛，一般细胞可传代10-50代）。3.衰退阶段：自发性转化（SpontaneousTransformation）：其标志是获得永生性（Immortality）或恶性性（Malignancy）:细胞获持久性增殖能力，这样的细胞群体称无限细胞系(Infinitecelll

7、ine)或连续细胞系(Continuouscellline)。如：BHK（仓鼠肾成纤维细胞），F9（小鼠胚胎癌细胞），M2R（黑色素瘤细胞）等。培养细胞的传代培养当细胞生长达到一定密度后，都需要做传代处理，传代的频率或间隔与培养液的性质、接种细胞的数量和细胞增殖速度有关。所谓细胞“一代”，即从细胞接种到分离再培养的一段时间。如某一细胞系为50代即该细胞已传代50次。细胞传代的三个阶段1）潜伏期（Latentphase）：细胞从接种到贴壁生长繁殖的一段时间。二倍体细胞该期时间长（24~96h）；连续

8、细胞系时间短（10~30min）。2)指数生长期（Logarthmicgrowthphase）：细胞增殖最旺盛时期，一般用细胞分裂指数（Mitoticindex，MI）表示，即细胞群中每1000个细胞中的分裂相数。体外培养细胞分裂指数介于0.1~0.5%，且受细胞种类培养液成分、pH、温度等影响。指数生长期是细胞活力最好的时期，在接种细胞数量适宜情况下，指数生长期持续3-5d后，随细胞数量不断增多，生长空间日趋减少，细胞相互接触汇合成片，呈现接触抑制（Contactinhibiti