NYT551-2002产蛋下降综合征诊断技术.pdf

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1、ICS11.220s41中华人民共和国农业行业标准NY/T551一2002产蛋下降综合征诊断技术Diagnostictechniquesforeggdropsyndrome2002一08一27发布2002一12一01实施中华人民共和国农业部发布NY/T551-2002前言产蛋下降综合征(eggdropsyndrome，简称EDS)是一种使母鸡产蛋减少、蛋质下降，由腺病毒引起的病毒性传染病，已成为产蛋损失的主要原因。我国农业部把该病列为二类动物疫病。本标准包括临床诊断、病毒分离和红细胞凝集抑制试验三种诊断技术。本标准的附录A为规范性附录。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检

2、疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位:天津出人境检验检疫局、哈尔滨兽医研究所。本标准主要起草人:曹燮政、唐秀英、柯忠哲、米保国、韩惠珠。NY/T551-2002产蛋下降综合征诊断技术1范围本标准规定了产蛋下降综合征的诊断技术要求。本标准适用于鸡的产蛋下降综合征的诊断和检疫，对其他禽类本病的检疫可以参照执行。2临床诊断2.1通过询问工作人员和查阅兽医记录，调查被检鸡群在过去一年内是否出现过产蛋下降综合征的症状，是否有产蛋下降综合征病例接触史，是否进行过相关的免疫接种，了解鸡群的来源及上代种群的疫病史，周围1km范围内是否发生过产蛋下降综合征，是否有水禽场或野生水禽栖息地。2.2临床检

3、查时要查阅鸡群生产记录和进行现场观察，重点注意下列情况:a)鸡群产蛋率下降1500^'6000;b)鸡蛋破损率5%^-20%;c)鸡蛋中有较多的畸形蛋、软壳蛋、无壳蛋、薄壳蛋、砂壳蛋，时有水样蛋清，棕色蛋鸡生产浅色蛋、白壳蛋;d)如不同品种鸡同时感染，产棕色蛋的品种减产甚于产白色蛋的品种;e)精神、采食、排泄及运动无明显异常。3实验室检验3.1病毒分离和鉴定3.1.1试荆11.1.1pH7.20.01mol/L磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)，配制方法见附录A(规范性附录)。3.1.1.2产蛋下降综合征抗原(EDS_76)o3.1.1.3EDS__阳性血清。3.1.2样品的采集和处理酌情

4、选择下列一种或数种:a)采扑杀鸡的输卵管和子宫的翻膜、卵巢，加灭菌石英砂研磨，加PBS制成1，5混悬液后冻融3次，3000r/min离心20min，取上清液，加人青霉素(使最终浓度为1000IU/mL),链霉素(使最终浓度为1000pg/mL),37℃作用1heb)采减产鸡的咽喉部、泄殖腔拭子，浸人5mLPBS中充分测挤后弃去拭子。将浸出液冻融2次，3000r/min离心20min，取上清液加人青霉素(使最终浓度为3000IU/mL),链霉素(使最终浓度为3000fag/mI,),37℃作用1h,c)采劣质蛋清，加等量PBS和青霉素〔使最终浓度为1000IU/mL),链霉素(使最终浓

5、度为1000pg/mL),37℃作用1h,d)采减产鸡抗凝血20ml,,2000r/min离心10min，弃上清液，吸取上层灰白色的白细胞层，加PBS洗涤、离心2次，弃上清液，再用5ml,PBS悬浮白细胞，冻融3次，加青霉素(使最终浓度为1000IU/mL),链霉素(使最终浓度为1000pg/mL),37℃作用1h,离心，取上清液。3.1.3接种分离取孵育10d-12d来自产蛋下降综合征红细胞凝集抑制抗体阴性鸭场鸭胚50枚，绒毛尿囊腔接种NY/'r551-2002样品(3.1.2)25枚，另25枚接种PBS，接种量均为。.2mL/枚。37'C孵育。弃48h内死亡的鸭胚，收获48h--

6、120h死亡和存活的鸭胚尿囊液。用1%鸡红细胞悬液(见3.2.2.4)测其血凝性(方法同3.2-4),若接种样品的鸭胚尿囊液能凝集红细胞，而接种PBS的鸭胚尿囊液不凝集红细胞，则进行分离物鉴定(见3.1.4);若样品接种鸭胚尿囊液不凝集红细胞，则用尿囊液接种鸭胚盲传，样品连续盲传三代仍不凝集红细胞者可判为病毒分离阴性。3.1.4分离物的鉴定用阳性血清和被鉴定抗原按表1进行红细胞凝集抑制试验，方法同3.2.5(阳性血清被鉴定抗原抑制滴度应与EDS-76对照抗原滴度相一致)。表中示例结果表示EDS_、病毒分离试验阳性。衰1应用红细胞凝集抑制试脸鉴定分离物血清抗原分离毒株阳性血清EDS抗原

7、阳性血清分离毒株++EDS-76抗原++注:必要时进行新城疫、传染性囊病、高致性禽流感的鉴别诊断。3.2红细胞凝集抑制试验3.2.1器材3.2.1.1微量反应板:96孔，v形底，同一次试验使用的反应板孔底角度应相同。3.2.1.2塑料采血管:内径2mm.长10cm,3.2.2试剂3-2.2-，抗原。3.2-2.2标准阳性血清。3.2-2.3阿氏液(Alsever)，配制方法见附录A(规范性附录)。3.2-2.41%鸡红细胞悬液:采不少于3只健康成年鸡血液，