医学免疫学实验教案

《医学免疫学实验教案》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、《医学免疫学》课程实验教案实验一实验名称：E-玫瑰花环形成实验计划学时：4学时实验目的与要求：1.掌握人T淋巴细胞形成E-花环的实验原理和操作方法。2.熟悉T淋巴细胞的功能检测方法。实验仪器、试剂：淋巴细胞分层液（Ficou）、1%绵羊红细胞、肝素抗凝人血、无钙镁Hanks液、水平离心机、0.8%戊二醛、37℃水浴箱、显微镜、其他。实验对象：实验同学实验原理：体外测定人外周血中T淋巴细胞数量的方法有多种,以玫瑰花环试验最为简易常用，T淋巴细胞数量的变化与机体的细胞免疫功能状态有一定关系。人周围血液中T淋巴细胞表

2、面有绵羊红细胞受体，与绵羊红细胞相遇时，在其周围形成花环样细胞团，凡能结合三个以上绵羊红细胞者称为E攻瑰花环形成细胞。正常人的花环形成率为50~70%，大致可以代表周围血中T细胞的百分数。临床上多用于某些疾病的诊断及疗效的观察。操作方法：1、取肝素抗凝血1~2ml，用分层液分出淋巴细胞并洗涤，用Hanks液调整细胞浓度为2—2.5×106ml。2、取小试管加入lml淋巴细胞悬液及1%羊红细胞0.lml，混匀置37℃水浴箱5分钟。3、800～1000r/min低速离心5分钟，放4℃冰箱2小时。4、轻轻旋转试管使团

3、块混匀，加2滴0.8%戊二醛液，摇匀，室温静置10分钟，使E花环固定。5、取悬液一滴放于载玻片上，将稀释的瑞氏染液加入玻片上染色3分钟。6、弃去染液，待干后油镜观察，计数200个淋巴细胞中形成花环的细胞效，算出百分率。实验现象与数据：1、淋巴细胞染成深蓝色，羊红细胞染成淡红色。2、每个淋巴细胞上粘附三个以上羊红细胞者即为玫瑰花环形成细胞。结果分析与结论：共计200个T淋巴细胞，算出形成花环细胞占全细胞数的百分率。正常人的花环形成率为50~70%，大致可以代表周围血中T细胞的百分数。临床上多用于某些疾病的诊断及疗

4、效的观察。注意事项：1.离心时注意使用800～1000r/min低速离心。2.要轻轻旋转试管使团块混匀，以防形成的花环散开。思考与创新：实验二实验名称：淋巴细胞转化实验计划学时：实验目的与要求：1.掌握淋巴细胞转化现象的试验方法和原理。2.熟悉淋巴母细胞形态学观察方法。实验仪器、试剂：1、正常人淋巴细胞（用分层液分出）。2、培养液：0.5%水解乳蛋白Hanks氏液（含20%小牛血清和青霉素100单位/ml、链霉素100微克/ml）。用5.6%NaHCO3调整PH至7.2~7.4。3、植物血凝素(PHA)，姬姆萨

5、染液。4、青霉素小瓶、吸管、载玻片、显微镜、离心机、恒温箱等。实验对象：实验同学实验原理：T淋巴细胞受到特异性抗原或非特异性抗原（PHA、PWM和ConA）刺激均能使细胞发生转化。T淋巴细胞转化率的高低可反映人体细胞免疫功能水平，常被作为细胞免疫功能指标之一。淋巴细胞转化试验可从周围血中分离出淋巴细胞，也可采用全血试验。操作方法：1、制备细胞悬液：用培养液将淋巴细胞稀释成2×l06/ml，细胞悬液。2、分装：向两个小瓶中各加2ml，细胞悬液,一瓶加PHA0.1ml(100单位)，另瓶不加作对照。3、37℃培养7

6、2小时。离心沉淀，用Hanks液洗两次。4、用沉淀推成血片,加姬姆萨染液栗色,镜下观察计数200个以上淋巴细胞，算出转化率。实验现象与数据：1、成热的淋巴细胞:与外周血中小淋巴细胞形态一致、直径6~8微米，核染色质网密、无核仁、胞浆略大于核贡轻度嗜碱性。2、过度型淋巴细胞:直径10一20微米核质密，但有明显核仁。3、淋巴母细胞，细胞增大，形态不规则，直径20~30微米，核也增大，染色质网纤细有核仁1~2个，胞浆扩大，强嗜碱性可见数个空泡及颗粒。4、网状细胞样母细胞：细胞增，形态不规则，核淡染有1一2个大小不规则

7、的核仁，胞浆扩大、含空泡，嗜碱性不强有透明感。用姬姆萨染色后，计算200个淋巴细胞中转化为母细胞的细胞数（包括过渡型、母细胞和分裂相淋巴细胞），依转比的百分率判定T淋巴细胞的功能。结果分析与结论：对照管转化率1%左右，加PHA之管转化主约为70%左右。T淋巴细胞转化率的高低可反映人体细胞免疫功能水平，常被作为细胞免疫功能指标之一。注意事项：思考与创新：实验三实验名称：中性粒细胞吞噬功能测定计划学时：4学时实验目的与要求：1、掌握中性粒细胞吞噬白色葡萄球菌实验的操作过程2、掌握瑞氏染色的基本步骤及吞噬百分率的计算

8、实验仪器、试剂：葡萄球菌培养液抗凝剂载玻片瑞氏染液水浴箱离心机注射器止血带消毒药水实验对象：实验同学实验原理：中性粒细胞具有非特异性的吞噬功能。操作方法：1.采血：取人静脉血2毫升，放入含肝素的小试管中，混匀，防止凝血。2.菌液制备：取葡萄球菌液，加生理盐水离心洗涤2～3次(2000r/min,5～10min），去上清，留沉淀加入生理盐水，用比浊法配制到适宜浓度（1×107个/ml）。