大肠杆菌和大肠菌群计数方法

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1、大肠杆菌和大肠菌群计数方法EnumerationofEscherichiacoliandthecoliform章节内容：•传统检测大肠菌群和大肠杆菌的方法•LST-MUG法检测冷藏和冷冻食品中的大肠杆菌（除双壳类软体动物制品外）•瓶装水检测方法•贝类和贝类肉制品检测方法•柑桔类水果汁中大肠杆菌检测方法•大肠菌群和大肠杆菌计数的其他方法•参考文件大肠埃希氏菌，以前常称大肠杆菌，于1885年由德国儿科医生TheodorEscherich发现，广泛存在于人类和温血动物的肠道中，是人类和动物肠道中需氧性共生菌的优势菌群，维持宿主健康部分生理功能必需的肠道菌。大肠埃希氏菌属肠杆菌科，肠杆菌科包括许多种细

2、菌，致病菌有沙门氏菌、志贺氏菌、和耶尔森氏菌。虽然大多数的大肠埃希氏菌为非致病菌，但是当宿主免疫力降低或细菌侵入肠道的外组织或器官时，可引起肠外感染。某些血清型可产生毒素，为致病性大肠埃希氏菌，可引起人类腹泻。1892年，Shardinger建议把大肠杆菌作为粪便污染的指标。由于大肠杆菌广泛存在于人类和动物中，而在其他地方少见。再者，大肠杆菌能发酵葡萄糖（以后改为为乳糖）产生气体。与已知的非产气致病菌容易区别开来。因此，大肠杆菌的检测已成为水和食品的近期粪便污染指标，表明可能含有致病菌。肠道中柠檬酸盐菌，克雷伯氏菌和肠杆菌能发酵乳糖，与大肠杆菌的生物型非常相似，使得把大肠杆菌作为健康威胁的指标

3、，在实际应用中很复杂。于是，大肠菌群这个术语用来描述这类肠道菌，大肠菌群不是一个分类学上的定义，而是一个工作定义，指的是一群在35℃培养48h，产酸产气的，革兰氏阴性的芽孢杆菌。1914年，每国公共健康协会把大肠菌群作为一个重要的卫生标准。虽然大肠菌群很容易检测到，但不一定与粪便污染有关系，因为在自然环境样品中也常存在。于是，粪大肠菌群就作为粪便污染的指标。首先由Eijkman提出，指的是在高温下发酵乳糖，是总大肠菌群的亚群，同时也称为耐热大肠菌群。粪大肠菌群的检测，除水、贝类、贝类养殖水在44.5℃进行，其他所有食品都在45.5℃进行。粪大肠菌群包含绝大部执蟪Ω司?克雷伯氏菌也作为粪大肠菌群

4、,但克雷伯氏菌的检出被认为与粪便污染并无关系。因此,大肠杆菌又被作为一个重要指标。快速鉴定大肠杆菌的新方法采用，使检测大肠杆菌相对容易了。现在,在不同的应用中,大肠杆菌,大肠菌群和粪大肠菌群这三种类型作为污染指标。大肠菌群常用于水或食品加工过程中卫生状况的指标。粪大肠菌群用于贝类和贝类养殖水的标准指标。大肠杆菌用于近期粪便污染或不卫生的处理过程指标。几乎所有的检测方法都是基于发酵乳糖。最可能数值法(MPN)是一种统计学方法,包括近似确证和完全验证。在检测过程中,样品要进行系列稀释。实验操作要记录发酵乳糖产气的阳性管数,然后进行另外两步实验,利用阳性结果查统计表(见附录2),估计细菌的数量,仅前

5、两步用于检测大肠菌群和粪大肠菌群,所有三步用于检测大肠杆菌。3管MPN法用于检测大部分食品,5管MPN法用于检测水,贝类和贝类养殖水。10管MPN法用于检测瓶装水或估计本样品为受到严重污染.另外还有一种固体平板计数法,使用VRBA培养,其含有中性红作指示剂,当发酵乳糖时产生红色菌落。还有一种膜过滤法检测大肠菌群和粪大肠菌群,主要根据发酵乳糖产酸形成不同的菌落颜色。本章节也介绍荧光法检测大肠杆菌；检测贝类的特殊方法；一种简单的瓶装水检测方法；和一种与HACCP法规中相关的检测柑桔类水果汁中大肠杆菌的方法.1.传统方法检测大肠菌群、粪大肠菌群、和大肠杆菌A．设备和材料1.水浴箱：44.5±0.2℃

6、，水浴箱中的水应高于试管中的培养基液面。2.插入型温度计：1-55℃，大约长55cm，精度为0.1℃，必须经NIST或相关部门检测合格3.培养箱：35±1.0℃4.电子天平：感量0.1g，称量范围大于2Kg5.均质器或均质瓶（见第1章）6.无菌吸管：1.0ml和10.0ml7.无菌器皿：（用于样品处理）8.无菌稀释用带盖玻璃瓶9.菌落计数器或同等产品10.长波紫外灯:（-365nm）不超过6w11.PH计B．培养基和试剂煌绿乳糖胆盐肉汤，2%（M25）LST肉汤（M76）EC肉汤(M49)L-EMB琼脂（M80）胰蛋白胨（色氨酸）肉汤（M164）MR-VP肉汤（M104）Koser枸橼酸盐肉汤

7、（M72）PCA（标准方法）（M124）Butterfield`s磷酸盐缓冲液（R11）或同等稀释液（贝类除外）Kovacs`试剂（R38）V-P试剂（R89）革兰氏染色液（R32）甲基红指示剂（R44）结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）（M174）VRBA-MUG琼脂（M175）EC-MUG培养基（M50）LST-MUG肉汤（M77）0.1%蛋白胨水稀释液（R56）C、MPN法—用于大肠菌群、粪大