pass选择抗体的金标准

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1、抗体,是我们非常熟悉的一种生物试剂, 但我们对抗体的鉴定,选择又了解多少呢?行业内提出全新的抗体选择标准“PASS”。通过客观的参数指标和专家的观点,科研人员只需要仔细的阅读抗体的说明书,再结合 “PASS”的抗体选择标准,就可以在一定程度上自己鉴定选择抗体的品质。 “PASS”抗体选择标准是指科研人员在选择抗体的时候,应留意抗体说明书中Purification抗体纯化工艺Antigen抗原信息Specificity抗体的特异性Source抗体的种属宿主选择 Purification抗体的优劣,包括特异性

2、,效价等方面和生产抗体过程中使用的纯化工艺是直接相关。但科研人员在选择抗体的时候去常常忽略这个方面。在行业内,使用蛋白A或G纯化单克隆抗体的方法被广泛接受。那么,多克隆抗体纯化工艺呢?很多公司都使用亲和纯化(affinitypurification)的方法来纯化多克隆抗体,该技术的关键在于使用的亲和原(affinityligand)。为了得到效价更高,特异性更好的抗体,一流的抗体公司尽可能使用全蛋白做为亲和原去得到优质的抗体,而且常常还会进行第二步的蛋白A或G的分化。相反,使用多肽作为亲和原,纯化到的多抗

3、表位有限,多抗的效价和特异性都会大打折扣。因此,一流的抗体公司的多克隆抗体的效价,特异性的优势明显,而且很多多克隆抗体可以用于中和和阻断实验。所以请各位科学家在选择抗体的时候注意抗体纯化方式:专家观点哥本哈根大学Dr.JohnCouchman认为优质抗体,尤其是多抗,应该是2步纯化:NotonlymustIaffinitypurifytheantibodybutalsoperformantigenadsorptiononmytissuessections.Unfortunately,manycommerc

4、ialantibodiesarenotaffinitypurifiedfromserum.哈佛大学神经学院的主任Dr.CliffordSaper在公开发表的文章中指出经过抗原亲和纯化的抗体的特异性更好:Affinitypurifyantiserabyrunningthemoveracolumntowhichtheantigenisfixedtoasupportmatrix.Suchantiseraarelesspronetoartifactandtendtohavelowerbackgroundstain

5、ing.Antigen抗原作为抗体生产的“原材料”之一,对于抗体质量的影响自然不言而喻。 目前用于抗体生产的抗原主要有两种:一种是使用仪器合成的不具备生物活性的多肽。使用多肽作为抗原的有三个缺点:(1)使用多肽来源的抗体所做的实验结果重复性较差;(2)因为很多公司并不提供作为抗原的多肽序列信息,因此对发表论文或者科研数据方面都有潜在的风险;(3)一般而言,较活性全蛋白来源的抗体,多肽来源的抗体的特异性和效价都比较低。一流的抗体公司坚持使用具有活性的全蛋白作为抗原,由此得到的抗体效价,特异性和可重复性方面更

6、胜一筹。由此得到的抗体自然识别样本的能力和准确性也更高。专家观点科研人员认为对于那些不提供多肽信息的抗体,科学界是应该抵制的。Theantigenisnotclearlystated。 Sometimesfor “proprietary” reasons,detailsontheantigenarewithheld.Thisisnotgoodscience,andweshouldboycottthoseantibodies. 依然是哈佛大学研究人员的观点:使用那些没有多肽信息的抗体是难以得到可重复的实验结

7、果,也不适合于严谨的科学研究。Severalmanufactureshaveclaimedthatsequenceinformationontheantigenwas“proprietary,”andtheywouldnotprovideit.Becauseworkusingtheseantibodiesisinherentlynotrepeatable,suchpapersarenotacceptableforpublication. Somecompaniesarewell-knownforkeepi

8、ngtheexactsequenceoftheimmunizingpeptideasa“tradesecret”.Investigatorsshouldbeawarethatsuchantiseraarenotfitforuseinseriousscientificwork. 哈佛大学的CliffordSaper教授在公开发表的文章中更是直接指出:永远不要使用抗原信息的抗体,这样的研究成果既不科学,也不能被发表!Neverbu

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