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1、番茄红素标准品的制备摘要采用番茄酱作原料,经0.5mol/LNaOH溶液40℃皂化,体积分数95%乙醇洗涤,乙酸乙酯40℃提取,得到番茄红素提取液。提取液经40℃减压浓缩,0℃结晶和重结晶,每千克番茄酱可得到纯度>99%的番茄红素标准品100mg左右。该标准品制备方法操作简单,有助于番茄红素高效液相色谱测定法的普及和推广。关键词番茄红素,标准品,制备2番茄红素(lycopene)是一种脂溶性天然色素,是类胡萝卜素的一种,广泛存在于番茄、胡萝卜、西瓜、南瓜、木瓜等植物果实中。其中以番茄果实含量最高,为30~140mg/kg。番茄红素不仅是无毒无副作用天然食用色素,而且还具有抗氧化、
2、防癌症和抑制突变等多种功能[1,2]。已被世界粮农组织(FAO)、世界卫生组织(WHO)和联合国食品添加剂委员会(JECFA)正式认定为营养与着色双重作用的功能性食品添加剂。番茄红素的测定主要采用以苏丹Ⅰ为标准品的分光光度法[3]。该方法优点是所用标准品价廉易得,但缺点是系统误差较大,不能排除胡萝卜素等类胡萝卜素的干扰。高效液相色谱法能将番茄红素从繁杂的类胡萝卜素组分中有效分离,因而干扰因素少,番茄红素测定结果准确[4~6]。但是高纯度番茄红素标准品价格昂贵,不易保存,高效液相色谱法因此难以普及。本文选用番茄酱作原料,经过预处理、醇洗、溶剂萃取、结晶和重结晶过程,制备了纯度>99
3、%的番茄红素标准品。1材料与方法1.1材料与仪器1.11材料番茄酱,产自新疆;乙酸乙酯,;体积分数95%乙醇,NaOH,;苏丹I号,分析纯;番茄红素对照品1.12仪器低速离心机LD42A,722S分光光度计,水浴恒温振荡器,数显电热保温箱,MoticBseries显微镜。1.2实验方法1.21番茄红素的直接测定法[3]1.2.11制作标准曲线准确称取标准苏丹I号色素250mg溶于无水乙醇,定容至50mL,移取0.26、0.52、0.78、1.04、1.30mL该溶液,分别置于50mL容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度。混合后即相当于0.5、1.0、1.5、2.0、2.5g/mL番茄红
4、素的苏丹I号色素标准溶液,然后,用722型分光光度计在番茄红素最大吸收波长处(465nm左右)分别测定其消光值,测定光压10V,光径1cm。以番茄红素每毫升微克数为横坐标,以消光值为纵坐标,绘制番茄红素标准曲线。1.2.12样品中番茄红素的测定样品用722型分光光度计在与制作标准曲相同的条件下,测其消光值,以蒸馏水作空白对照。经查标准曲线可知番茄红素含量,通过稀释倍数的折算可知样品中番茄红素的含量。1.22番茄红素的高效液相色谱分析法色谱条件:色谱柱,大连依利特ODS2反相柱2(46mm×250mm,5μm);流动相,乙腈:CHCl3体积比为92:8;检测波长472nm,柱温:2
5、5℃,流速1mL/min,进样量20μL。1.23番茄红素标准品的制备方法(46mm×250mm,5μm);流动相,乙腈:CHCl3体积比为92:8;检测波长472nm,柱温:25℃,流速1mL/min,进样量20μL。1.23番茄红素标准品的制备方法番茄酱①皂化②乙醇处理③乙酸乙酯提取④减压浓缩⑤结晶⑥重结晶①皂化:称取100g番茄酱,加100mL0.522Mol/LNaOH溶液40℃皂化1h。番茄酱经123的②~⑤,得到番茄红素样品②乙醇处理:用600mL的体积分数95%乙醇A。肉眼观察样品A金属光泽不明显,显微镜下观察分3次洗涤皂化后的番茄酱,去除部分杂质并脱水得样品A色泽
6、、结晶形状都不均一(图1A),经测定样到脱水番茄酱。品A纯度为728%。③乙酸乙酯提取:向脱水番茄酱中加入150mL番茄酱经123的①~⑤,得到番茄红素样品乙酸乙酯40提取2h,过滤,滤渣中加入150mL乙B。肉眼观察样品B有明显的金属光泽,显微镜下观酸乙酯40再提取2h,合并2次滤液。察样品B色泽均一,为针状结晶(图1B),经测定样④减压浓缩:滤液于40减压浓缩至原液的1/品B纯度为954%。3左右。上述结果的发生是因为番茄中含有脂肪酸甘油酯⑤结晶:浓缩液置于0结晶。及各种游离脂肪酸等非水溶性组分,在乙酸乙酯提取番⑥重结晶:结晶于60重新溶解于乙酸乙酯中茄红素的过程中它们被一并
7、提取出来,包络在番茄红素至饱和,置于0再次结晶。分子上,从而影响了番茄红素的结晶和纯度。因此,番2结果与讨论茄酱必须经过皂化处理才能用于高纯度番茄红素的制备。经优化,皂化采用番茄酱与05mol/L的NaOH溶2.1皂化处理对番茄红素样品纯度的影响液之比(gmL)=11,40皂化1h效果较好。图1番茄红素样品显微镜下形态图(放大100倍)22.2乙醇处理对番茄红素样品纯度的影响番茄酱中含有大量水分,不宜直接提取番茄红素。通常可采用烘干或用乙醇进行脱水[7]。由于番茄红素不稳定,在烘
