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1、平邑甜茶论文：平邑甜茶MhWRKY15基因的克隆及表达分析【中文摘要】转录因子是结合在基因特定DNA序列上的蛋白质,它通过增强或抑制基因的转录效率来调控基因的表达水平,真核生物的基因表达调控主要是在转录水平进行。WRKY转录因子作为一种重要的诱导型调节因子,参与植物的多种防卫反应、生长发育调节以及物质代谢调节等各种重要生理活动。平邑甜茶(Malushupehensis(Pamp)Rehd.varpinyiensisJiang)是我国特有的植物资源,常用作苹果和观赏海棠的砧木。本研究以平邑甜茶为试材,克隆了MhWRKY15基因的全长cDNA序列,并运用
2、生物信息学手段分析了其基因序列与编码蛋白的性质和功能;同时,研究了其在生长过程及逆境胁迫下的表达情况,并成功构建RNAi载体并转化拟南芥,获得转基因拟南芥植株。主要结果如下:1).获得了平邑甜茶MhWRKY15基因,该基因cDNA全长1091bp,含有810bp的完整开放阅读框,编码269个氨基酸,属于WRKY类转录因子的第II组,为WRKY15家族成员。GenBank登录号为GU576874。2).生物信息学分析表明,MhWRKY15编码蛋白为可溶性蛋白,其分子式为C_(1263)H_(1...【英文摘要】Transcriptionfactorsw
3、ereproteinsthatbindingwithspecificDNAsequencesoftargetgene,whichcouldregulategeneexpressionbyenhancingorinhibitingtheefficiencyofgenetranscription.Regulationofthegeneexpressionineukaryoticwasmainlyatthetranscriptionallevel.WRKYtranscriptionfactorwasanimportantinducibleregulator
4、yfactorwhichparticipatedinavarietyofimportantphysiologicalactivities,suchasplantdefenseresponses,growthregulationandmetabolismregulation.Malus...【关键词】平邑甜茶WRKY15基因分离RNAi拟南芥转化半定量RT-PCR【英文关键词】Malushupehensis(Pamp)Rehd.WRKY15geneisolationRNAiTransformationofArabidopsisthalianasemiR
5、T-PCR【目录】平邑甜茶MhWRKY15基因的克隆及表达分析英文缩写符号及其中英文对照表4-9中文摘要9-10Abstract10-111 前言12-231.1WRKY的结构特征及其分类12-131.2WRKY转录因子的结构域13-141.3WRKY转录因子的表达及其生物学功能14-201.3.1WRKY转录因子的表达特性14-151.3.2WRKY转录因子在植物防卫反应中的作用15-171.3.3WRKY转录因子在植物形态建成中的作用171.3.4WRKY转录因子在植物代谢中的作用17-181.3.5WRKY与MAPK相互作用关系18-201.4
6、果树转录因子研究进展20-221.5本研究目的和意义22-232材料与方法23-372.1试验材料23-242.1.1试材232.1.2菌株与质粒232.1.3酶及生化试剂232.1.4PCR引物23-242.2试验方法24-372.2.1平邑甜茶总RNA的提取24-252.2.2RT-PCR反转录合成cDNA25-262.2.3MhWRKY15全长序列的扩增26-312.2.3.1巢式PCR扩增MhWRKY15中间片段26-272.2.3.23’-RACE扩增3’端序列272.2.3.35’-RACE获得5’端序列27-312.2.4DNA片段与克
7、隆载体的连接312.2.5大肠杆菌感受态细胞的制备和转化31-322.2.5.1大肠杆菌感受态细胞的制备312.2.5.2大肠杆菌感受态细胞的转化31-322.2.6碱法小量质粒DNA的提取322.2.7凝胶电泳中DNA片段的回收32-332.2.8质粒DNA的酶切鉴定332.2.9DNA序列测定332.2.10pFGC5941-RNAi-MhWRKY15表达载体的构建33-342.2.11拟南芥转化及转化植株的PCR鉴定34-352.2.12pCAMBIA1390-MhWRKY15-GFP表达载体的构建352.2.13根癌农杆菌GV3101和EHA
8、105感受态细胞的制备与转化35-362.2.13.1根癌农杆菌感受态细胞制备35-362.2.13.2冻融
